MIO основа, подготовка и употреба

на половин MIO е биохимичен тест, който се използва за идентифициране на видовете бактерии, принадлежащи към семейството Enterobacteriaceae. Той е доста хранителен и се състои от глюкоза, дрождев екстракт, пептон, триплей, L-орнитин хидрохлорид, бромокрезолово пурпурно и агар.

Значението на неговия акроним (MIO) описва всеки от параметрите, които могат да се наблюдават в тази среда; подвижност, индол и орнитин. Подвижността е способността на микроорганизма да се движи чрез наличието на флагела. За да се наблюдава това свойство, консистенцията на средата трябва да бъде полутвърда, така че препаратът има по-малко количество агар..

Производството на индол доказва наличието на ензим триптофаназа, който действа върху аминокиселината триптофан, като е необходимо използването на разкриващ реагент, за да се получи видимо производство на индол..

Накрая, орнитинът определя дали бактерията е способна да декарбоксилира аминокиселината, т.е. ако има ензим оринитин декарбоксилаза.

индекс

• 1 Фондация
  • 1.1 Пептон, екстракт от дрожди и трипсин
  • 1.2 Подвижност
  • 1.3 Глюкоза
  • 1.4 L-орнитин
  • 1.5 Индикатор за рН
• 2 Техника на засяване и развитие
• 3 Подготовка
  • 3.1 MIO Medium
  • 3.2 Реактив на Ковач (разработчик на индолови тестове)
• 4 Използване
• 5 Контрол на качеството
• 6 Препратки

фундамент

Пептон, екстракт от дрожди и трипсин

Тези елементи допринасят за хранителната сила на тази среда. Те служат като източник на хранителни вещества и незаменими аминокиселини за бактериално развитие.

В допълнение, triptein е източник на триптофан, за да докаже наличието на ензима триптофаназа, който разгражда триптофана чрез редуктивно деаминиране, освобождаващо индол, пирувинова киселина, амоняк и енергия..

Индолът е безцветен, така че неговото присъствие се разкрива чрез добавяне на пет капки реагент на Ehrlich или Kovacs, и двата с р-диметиламинобензалдехид.

Алдехидната група на това съединение реагира с индол, като генерира пръстенообразен фуксие-червен продукт на повърхността на агара..

Всяка следа от цвят трябва да се разглежда като положително доказателство. Тестът трябва да се чете незабавно, защото след известно време цветът се влошава.

От друга страна, този тест трябва да се разкрие след като се регистрират резултатите от подвижността и декарбоксилирането на орнитин..

интерпретация

Положителен тест: образуване на фуксие червен пръстен при добавяне на реагента Kovacs капки.

Отрицателен тест: няма образуване на пръстен.

подвижност

Способността на бактериите да се движат ще бъде доказана, ако се наблюдава мътна среда или ако има дебела линия на растеж, която се разширява около началната инокулация..

Отрицателният тест за подвижност ще бъде доказан чрез наблюдение на тънка линия на растеж, и всички около него ще бъдат без растеж.

Важно е мотилитетът да се прочете преди разкриването на индола, тъй като прибавянето на реагента заобикаля цялата среда.

При мобилните, но бавно растящи бактерии е трудно да се демонстрира тяхната подвижност с тази среда. В този случай се препоръчва да се използват други тестове или методи, като например среда на подвижност или метод на капки.

гликоза

Глюкозата е ферментиралата въглехидрата, която в допълнение към енергията подкислява средата, необходимо условие за декарбоксилирането на аминокиселината орнитин да настъпи.

Ферментацията на глюкоза трябва винаги да се извършва, въз основа на принципа, че всички бактерии, принадлежащи към семейството Enterobacteriaceae, ферментират глюкоза.

L-Орнитин

Ако бактерията произвежда ензима орнитин декарбоксилаза, тя може да действа, когато средата се подкиселява чрез ферментация на глюкоза..

Ензимът орнитин декарбоксилаза действа върху карбоксилната група на аминокиселината, произвеждаща амин, наречен путрезин, който алкализира средата отново.

Този тест трябва да се прочете след 24 часа инкубация, защото ако се опитате да прочетете, преди да можете да интерпретирате неправилно теста с фалшиво отрицателно.

Трябва да се помни, че първата реакция, която се случва, е ферментацията на глюкоза, така че средата става жълта в начална фаза (първите 10 до 12 часа). Ако впоследствие настъпи декарбоксилиране на орнитин, средата ще стане лилава.

Важно е да се интерпретира тестът за декарбоксилиране на орнитин преди да се разкрие индол, тъй като добавянето на реагент на Kovacs променя цвета на средата.

интерпретация

Отрицателен тест: средно жълт или с жълт фон.

Положителен тест: напълно лилаво.

PH индикатор

В този случай се използва бромокрезолово лилаво; лицето, което отговаря за разкриването, когато има промяна на рН в средата. Когато се подкислява, индикаторът става жълт, а когато се алкализира, става виолетов.

Семена и техника за развитие

За да се засади MIO средата, се използва прави линия или игла и с нея се събира част от изследваната колония..

Направена е дълбока пробиване в MIO средата по права линия. Не е препоръчително да се прави двойна пункция, тъй като може да се получи фалшиво изображение на подвижността, ако пункциите не се извършват на едно и също място.

Инкубирайте за 24 до 48 часа при 37 ° С в аеробиоза. Наблюдавайте резултатите в този ред: подвижност, декарбоксилиране на орнитин и накрая разкрийте индола.

Препоръчително е да се вземат асептично 2 ml от средата, да се прехвърли в стерилна епруветка и да се извърши индоловия тест, така че ако е отрицателен, останалата част от първоначалната тръба може да бъде инкубирана за 24 часа, за да се разкрие отново индолът..

Разработването на индол се извършва по следния начин: 3 до 5 капки от реагента на Kovacs се добавят към MIO средата и се разбъркват енергично. Наблюдава се, ако се появи фуксие червен пръстен или не.

подготовка

Половината MIO

Претеглят се 31 g от средата MIO и се разтварят в един литър дестилирана вода.

Загрява се, докато сместа кипи една минута, като се разбърква често, докато агарът се разтвори напълно. Разпределете 4 ml от средата в 13/100 епруветки с памучен капак.

Стерилизира се в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути. Извадете от автоклава и оставете да стои направо в рафт, така че да се образува полутвърд блок.

Да се ​​съхранява в хладилник 2-8 ° С. Оставете да се разбърка преди засаждането на бактериалния щам.

Цветът на дехидратираната среда е бежова, а тази на средата - леко пурпурен.

Крайното рН на приготвената среда е 6.5 ± 0.2

Средата става жълта с кисело рН и е пурпурен при алкално рН.

Реагент на Ковач (разработчик на индолови тестове)

Този реагент се приготвя, както следва:

Измерват се 150 ml амил, изоамил или бутилов алкохол (всеки от трите). В него се разтварят 10 g р-диметиламинобензалдехид. След това бавно се добавят 50 ml концентрирана солна киселина.

Приготвеният реагент е безцветен или светложълт. Трябва да се съхранява в кехлибарена бутилка и да се съхранява в хладилник. Тъмнокафяв цвят показва влошаването му.

Също така реактивът на Kovacs може да бъде заменен с реактив на Ehrlich. Последните, които са по-чувствителни, се предпочита да разкриват индол в бактерии, които го произвеждат в минимални количества, както при някои грам отрицателни неферментиращи бацили и някои анаероби.

употреба

Тази среда е тест, който допълва набор от биохимични тестове за идентифициране на бактерии, принадлежащи към семейството Enterobacteriaceae.

Данните за декарбоксилиране на орнитин служат за диференциране Shigella sonnei, което дава положително, на Shigella boydii, Shigella flexneri и S. dysenterieae, които дават негативи.

Той също така отличава рода Klebsiella, който дава отрицателен, род Enterobacter, където повечето от неговите видове са положителни.

Контрол на качеството

Всеки път, когато се приготвя партида от MIO среда, може да се извърши контролен тест. За тази цел се използват известни или сертифицирани щамове за наблюдение на поведението на средата.

Щамовете, които могат да се използват, са Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes и Proteus mirabilis.

Очакваните резултати са E. coli и M. morganii. Дан М: +, I: + и О: +.

Klebsiella pneumoniae дава всички отрицателни (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis и Enterobacter aerogenes dan M: + I: - и O: +.

препратки

1. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентификация на бактерии от клинично значение. 3-то изд. Редакция Панамерикана. Буенос Айрес Аржентина.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
4. Laboratories Britania. MIO Medio 2015. Достъпни на: britanialab.com
5. BD Laboratories BBL подвижност индол орнитин (MIO) среда. 2007. Налично на: bd.com
6. Valtek Laboratories Medium M.I.O. Подвижност, индол, орнитин. 2010. Налично на: andinamedica.com