Половината SIM основа, подготовка и употреба

на наполовина SIM Той е полутвърд и диференциален агар, специално проектиран да подпомогне идентифицирането на някои бактерии, главно от семейството Enterobacteriaceae. Състои се от триплей, пептон, железен сулфат, амониев сулфат, натриев тиосулфат и агар.

Тази среда позволява изпълнението на три важни теста: производството на сероводород (Н₂S), образуване на индол и подвижност, следователно акроним SIM. Поради голямата си полезност не може да липсва в бактериологичната лаборатория.

За разлика от други среди, това трябва да е полутвърдо, така че да се открива способността за движение на някои бактерии. В този смисъл, този тест работи много добре за Enterobacteriaceae, но не и за Грам-отрицателни, неферментиращи бацили, където е за предпочитане да се използват други методи, като например, предстоящото падане.

СИМ средата позволява да се разграничат някои специфични свойства, които характеризират някои бактерии по отношение на други. Например Escherichia coli тя се отличава с Н₂S (-), индол (+) и подвижност (+), докато Proteus mirabilis това е Н₂S (+), индол (-), подвижност (+).

индекс

• 1 Фондация
  • 1.1 Източник на захранване
  • 1.2 Производство на сероводород
  • 1.3 Образуване на индол
  • 1.4 Подвижност
• 2 Подготовка
  • 2.1 Половината SIM
  • 2.2 Реактив на Ковач
  • 2.3 Реактив на Erlich
• 3 Използване
  • 3.1 Размножаване
• 4 Контрол на качеството
• 5 Ограничения
• 6 Препратки

фундамент

Това е хранителна среда, която се счита за диференцирана, тъй като нейната употреба успява да разграничи микроорганизмите, способни да произвеждат сероводород от тези, които не го правят; също така подчертава тези, които образуват индол от триптофана на тези, които не го образуват, и накрая разграничава подвижността от неподвижните бактерии..

Източник на захранване

Както всяка културална среда, тя има елементи, които осигуряват необходимите хранителни вещества, така че да не могат да се развият недобри микроорганизми. Тези елементи са представени от пептоните и триптената.

Развитието на микроорганизма в околната среда е от съществено значение, за да може да се наблюдава наличието или отсъствието на характеристиките, оценени от тази среда.

Производство на сероводород

Буквата S на акронима SIM се отнася до производството на сероводород (Н₂S). Бактериите, способни да образуват сероводород, ще приемат сярата на натриевия тиосулфат.

След като се образува Н₂S - безцветни газове - реагира с наличната в средата сол желязо, образувайки железен сулфид, ясно видим (черна утайка). Бактерии, които не образуват Н₂S, остави средата на оригиналния цвят (бежово).

Наличието на черна утайка може да възпрепятства интерпретирането на подвижността. Известно е обаче, че по-голямата част от H-продуциращите ентеробактерии₂S са позитивна подвижност, като Salmonella, Proteus и Citrobacter. В допълнение, черната утайка, която покрива почти цялата среда, предполага положителна подвижност.

Индола обучение

Втората буква на акронима SIM е "I", която представлява образуването на индол.

В този смисъл, tripteína, освен че е източник на хранителни вещества, изпълнява друга основна функция. Този пептон е богат на аминокиселина, наречена триптофан, следователно може да покаже бактериите, които произвеждат триптофаназа.

Този ензим е отговорен за подрязване на аминокиселината триптофан с последващо образуване на индол (безцветно вещество), пирувинова киселина и амоний..

Ето защо, за да се демонстрира тази реакция, е необходимо да се добави разкриващо вещество (реактив на Ерлих или реагент на Ковач). Всяка една от тях реагира с индола, образувайки пръстеновидно червено-фуксиево вещество на повърхността на агара. Ако се появи фуксиеният пръстен, индоловият тест се интерпретира като положителен.

Бактериите, които нямат този ензим, няма да образуват пръстена и се интерпретират като отрицателен индолов тест.

Важно е да се отбележи, че индоловият тест трябва да бъде последен, който трябва да бъде интерпретиран, тъй като след като реагентът е добавен, средата става мътна, което затруднява визуализирането на подвижността..

подвижност

Накрая буквата "М" на думата СИМ означава подвижност. За да може да се оцени подвижността, тази среда е стратегически полутвърда, защото тази характеристика е от съществено значение, за да може да се наблюдава дали има бактериално движение. Бактериите с флагела са тези, които дават този положителен тест.

Положителен тест ще бъде очевиден, когато се наблюдава мътност, както в първоначалния инокулум, така и около него. Докато не-мобилните бактерии се развиват само в първоначалния път на инокулация.

подготовка

Половината SIM

Претеглят се 30 g от дехидратираната среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Сместа се оставя да престои 5 минути и след това се загрява до кипене, като се разбърква често, докато се разтвори напълно..

Сместа се разпределя в епруветки с памучен капак и се автоклавира при 121 ° С за 15 минути. Отстранете тръбната стойка от автоклава и я оставете да се втвърди в изправено положение, така че средата да е във формата на блок..

За съхранение се съхранява в хладилник, докато се използва. Приготвената среда трябва да има крайно рН от 7,3 ± 0,2.

В момента на инокулиране на средата, тя трябва да бъде при стайна температура. Цветът на средата е бежов.

Реагент на Ковак

Измерват се 150 ml амил или изоамил или бутилов алкохол. (Използвайте една от трите споменати).

Разтварят се 10 g р-диметиламинобензалдехид. След това бавно се добавят 50 ml концентрирана солна киселина.

Готовият за употреба реагент е безцветен или светложълт. Трябва да се съхранява в кехлибарена бутилка и да се съхранява в хладилник. Да не се използва, ако има тъмнокафяв цвят; което показва, че е повреден. Този реагент е предпочитан при работа с ентеробактерии.

Ерлихов реагент

Претеглят се 2 g р-диметиламинобензалдехид и се разтварят в 190 ml абсолютен етилов алкохол и се разбърква бавно с 40 ml концентрирана солна киселина. Съхранявайте реактива на Ковак по същия начин. Ерлихов реактив се използва повече за неферментиращи и анаеробни бактерии.

приложения

Средата на СИМ се използва високо в бактериологичните лаборатории. Предимство е, че в една и съща тръба могат да се наблюдават три основни характеристики при идентифицирането на Enterobacteriaceae.

засадени

Правилният начин за засяване на тази среда е чрез използване на иглата, с която се взема част от чистата колония, която трябва да се изследва, и се поставя вертикално в центъра на средата. Трябва да се направи еднократен натиск. Пункцията не трябва да достига дъното на тръбата, а правилното е да покрива само две трети от дълбочината.

Не е препоръчително да се повтаря инокулумът, тъй като това може да доведе до фалшиви интерпретации на позитивната подвижност. Инокулираната среда се инкубира в аеробиоза при 37 ° С за 24 часа.

Завършете времето, което се наблюдава, ако е имало или няма производство на Н₂Прочетете S и подвижността. Накрая се разкрива индол, като се добавят 3 до 4 капки от реактива на Ehrlich или Kovac, той се смесва внимателно и се интерпретира..

Контрол на качеството

Като контрола за стерилност, една или две епруветки се инкубират без инокулация в пещ при 37 ° С за 24 часа. Очаква се след този период да няма растеж или промяна на цвета.

Като качествен контрол могат да се използват сертифицирани известни щамове, като: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Очакваните резултати са: Escherichia coli Н₂S отрицателен, индол и позитивна подвижност, Enterobacter aerogenes само положителна подвижност, Salmonella typhimurium Н₂S и позитивна подвижност, с отрицателен индол. Proteus vulgaris всички положителни, докато Klebsiella pneumoniae и Shigella sonnei всички отрицателни.

ограничения

-Някои щамове на Morganella morganii, Сред другите щамове може да се получи кафяв пигмент в тази среда поради производството на меланин, това не трябва да се бърка с утайката от железен сулфид. При неопитни професионалисти тази ситуация може да генерира фалшиви положителни резултати при тълкуването на теста Н₂S.

-Строгите аеробни бактерии ще растат само върху повърхността на тръбата, което прави трудно интерпретирането на подвижността.

препратки

1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Налично на: bd.com
2. Neogen Laboratories SIM Medium. Предлага се на адрес: foodsafety
3. Difco Франсиско Сория Мелгизо. SIM Medium. 2009. Налично на: http://f-soria.es
4. Лаборатория Brizuela-Lab SIM Medium. Предлага се на адрес: .brizuela-lab.com
5. Laboratories Britania. SIM Medium. 2015. Налично на: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.