Подготовка на културните медии от какво се състои, цели и стъпки

на подготовка на хранителна среда Това е рутинна методология, използвана в лабораториите за растежа на желаните микроорганизми. Културалната среда е твърда, течна или полутвърда форма, която притежава всички хранителни вещества, необходими за развитието на микробна популация.

Като цяло, средствата за отглеждане на микроорганизми са богати на протеини и аминокиселини и обикновено съдържат някакъв компонент, който благоприятства растежа на организма, който искате да изучавате, като витамини, кръв, серум и др..

Няма обща или универсална хранителна среда, тъй като нейният състав варира в зависимост от нуждите на микроорганизма от интерес. Някои бактерии могат да се развият във всяка културална среда, но други имат специални изисквания.

индекс

• 1 От какво се състои??
  • 1.1 Агар
  • 1.2 Течности
  • 1.3 Извлечения
  • 1.4 Пептони
  • 1.5 Амортисьори
• 2 Цели
• 3 Видове медии
  • 3.1 Въз основа на състава му
  • 3.2 На базата на вида на микроорганизма
• 4 стъпки
• 5 Препратки

От какво се състои??

Микроорганизмите, като гъбичките и бактериите, не могат да бъдат изследвани индивидуално поради малкия им размер. Следователно те трябва да бъдат култивирани по изкуствен начин, който позволява значително увеличаване на населението.

Например, ако искаме да изучаваме бактерии, трябва да им осигурим правилните условия, така че те да могат да се размножават и да образуват колония (която може да се наблюдава с просто око).

Получаването на хранителната среда варира в широки граници в зависимост от вида на микроорганизма, който човек желае да култивира. Преди да го приготвите, е необходимо да знаете основните хранителни нужди на работната маса.

След това ще бъдат описани най-често срещаните компоненти, използвани в културалните среди, за да имат обща представа за тяхната подготовка:

агар

Използва се в култури като желиращ агент и се добавя при търсене на твърда или полутвърда среда. Първият втвърдяващ агент, използван при приготвянето на среда, е желатин, но през 1883 г. агарът е въведен в света на бактериологията от W. Hesse.

Бактериологичният агар има за основен компонент полизахарид от сложни клони, извлечени от водорасли. Това съединение се използва като сгъстител за обичайни храни като сладолед и конфитюри.

Това е много ценен елемент в микробиологията по няколко причини. Главно защото микроорганизмите не могат да го разграждат, втечнява се при температура 100 ° C и остава в течно състояние до достигане на 45 ° C или по-малко..

В случай, че искате да приготвите твърда среда, концентрацията на агар трябва да бъде около 1,5%, докато полу-твърдите вещества трябва да се приготвят от 0,3 до 0,5%..

течности

Отглеждането на патогенни организми изисква телесни течности, така че те да могат да се развиват както в естествената им среда. По тази причина се добавя цяла или дефибрилирана кръв. Течността се екстрахира от здраво животно и след стерилизиране се добавя към културалната среда.

откъси

Те се получават от различни животински части (като месо или черен дроб) или зеленчуци (семена) и се обработват, за да се получи твърд концентрат под формата на паста или прах. Най-често срещаните са дрожди, малц и месо.

Peptonas

Тези органични съединения се получават чрез ензимна или химична хидролиза на животински или растителни тъкани. Целта е да се добави съдържание, богато на аминокиселини, които са основните единици на протеините.

Амортисьори

Буферите или буферните системи избягват внезапни промени в рН и спомагат за поддържане на оптималния диапазон, който тялото толерира.

Повечето организми могат да се развиват правилно при рН 7, въпреки че някои бактерии предпочитат алкална среда. Въпреки това, съществуват бактерии, които издържат на вариации на рН между стойностите на 6 и 9.

При видове, чувствителни към рН, увреждането не се предизвиква от прекомерното количество водород или хидроксилни йони, а от увеличаване на слабите киселини или основи, които могат да проникнат в клетката..

Също така се добавят индикатори, че рН за наблюдение и избягване на отклонения, причинени от ферментация или други процеси.

цели

Основната цел при подготовката на хранителна среда е да се добавят всички необходими компоненти за успешното развитие на организма, който желае да бъде изолиран. Най-ефективната комбинация от компоненти и хранителни вещества трябва да бъде идентифицирана, за да се постигне желаната среда.

Приготвянето и съхранението на средата са от решаващо значение за успешното развитие, тъй като тези стъпки зависят от състава на околната среда и наличието на хранителни вещества.

Трябва да се има предвид, че култивирането на микроорганизми е задача, която е повлияна от няколко фактора, външни за културалната среда, като интензивността на получената светлина, температурата и нивото на киселинност или алкалност на средата. Следователно всяка от тези променливи трябва да бъде взета под внимание.

Видове медии

Въз основа на неговия състав

Въз основа на неговия състав има три основни вида култури: естествени или емпирични, полусинтетични и определени синтетични или химични средства.

Природна среда

В естествена среда точния състав е неизвестен. Те включват съставки като мляко, разредена кръв, зеленчукови сокове, екстракти и инфузии на месо и пептони. Поради икономически причини често се добавят компоненти с ниска себестойност като соев екстракт, суроватка, меласа и др..

Полусинтетична среда

Нарича се полусинтетична среда, ако съставът му е частично известен. Всяка среда, съдържаща агар, става полусинтетична среда.

Сред тях имаме тапа декстрозен агар, czapek-dox агар, овесен агар, пептонов месен агар, наред с други примери..

Синтетична или химически определена среда

В този случай съставът на средата - по отношение на количеството въглерод, азот, сяра, фосфор и други източници на растежен фактор - е напълно известен. Това е много полезно, ако искате да получите възпроизводими резултати за други изследователи.

За така наречените "микроорганизми със специални изисквания за растеж" е необходимо да се добавят необходимите компоненти. Пример за този тип са Lactobacillus.

Въз основа на вида на микроорганизма

По същия начин има и друга класификация за културална среда, основана на вида на микроорганизма, който може да расте в него. Следвайки този принцип имаме следните общи средства за обогатяване, селективно и диференциално. Всеки от тях е описан по-долу:

Общи средства

Те признават развитието на голямо разнообразие от микроорганизми. Ако някой организъм се нуждае от специални условия за растежа си, той няма да може да се развива успешно в този вид култура.

Средства за обогатяване

Средствата за обогатяване благоприятстват растежа на определен вид микроорганизми, но не е добавено никакво вещество, което да предотвратява растежа на други видове микроби в него..

Селективни медии

Те търсят специфичния растеж на микроорганизма, наричат ​​го гъбички, бактерии, протозои, наред с други. За да направят това, те възпрепятстват развитието на другите.

За постигането на тази цел могат да се добавят смъртоносни химически съединения за голяма група микроорганизми и безвредни за организма, които представляват интерес, или за добавяне на енергийни източници, които могат да бъдат усвоени само от търсения микроб.

Селективни среди се използват, когато се вземат медицински проби, за да се развие патогенен микроорганизъм. Тук е необходимо да се благоприятства растежа на патогена и да се инхибира развитието на нормалната микробна флора от пациента.

Бисмут сулфитен агар, например, не позволява растежа на грам-положителни бактерии и голям брой бактерии, открити в стомашно-чревната кухина. Затова се използва за култивиране на грам-отрицателните бактерии, които причиняват коремен тиф, Salmonella typhi в фекални проби.

Диференциални медии

Този тип използва известна диагностична характеристика на интересуващия ни организъм (особености в метаболизма му), за да може да ги идентифицира срещу друг вид, който расте в същата среда.

Както диференциалната среда, така и селективните среди са много полезни в областта на клиничната микробиология и общественото здраве, тъй като тези дисциплини трябва да открият наличието на специфични микроорганизми, свързани с лоши хигиенни условия или условия..

Към културата могат да се добавят индикаторни вещества, които дават отличителна характеристика на желаната колония. Например, агар-еозин-метиленово синьо (съкратено EMB) и MacConkey-агар се добавят с лактоза и рН индикатор.

Така, когато в тези среди се развива колония, способна да ферментира лактоза и да произвежда алдехиди, те могат да се наблюдават в специален цвят..

стъпки

Понастоящем културалната среда може да бъде закупена в лиофилизирана форма. Следователно, препаратът се улеснява и само продуктът се рехидратира. Съдържанието трябва да се претегли (като се вземе предвид крайното количество, което искате да се приготви) и да се разтвори в дестилирана вода, следвайки всички показания на продукта.

Съдържанието на течната среда трябва да се раздели на желаните съдове (петриеви панички, епруветки и др.) За последваща стерилизация. За да се разпредели твърдата среда е необходимо да се разтопи с помощта на микровълнова пещ или чрез подлагане на материала на водна баня. РН на средата трябва да се регулира.

Обикновено агарът се използва в епруветки или в петриеви блюда. Ако агарът се втвърдява в наклонена позиция, с подходящ ъгъл, така че крайният крайен край е диагонален, това разположение е известно като върхове на флейта или наклонени тръби. Когато агарът се втвърдява в напълно вертикално положение, той се нарича "дълбок".

След стерилизиране на средата - като се използва автоклав - се оставя да се охлади. С тях трябва да се работи в среда, свободна от микроорганизми, като най-често се работи с осветена запалка, която осигурява асептична среда в неговата околност..

препратки

1. Celis, J.E. (2006). Клетъчна биология: лабораторен наръчник (Том 2). Elsevier.
2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G. (1991). Бейли Скот: микробиологична диагноза. Панамериканска медицина.
3. Olivas, E. (2004). Ръководство за практики по микробиология I и II и паразитология. Автономният университет в Сиудад Хуарес.
4. Schlegel, H. G., & Zaborosch, C. (1993). Обща микробиология. Cambridge University Press.
5. Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C.L. (2007). Въведение в микробиологията. Ed. Panamericana Medical.