Байърд Паркър агар основа, подготовка и употреба

на Агар тя е твърда, селективна и диференциална културална среда. Той е създаден през 1962 г. за откриване и коагулазно позитивен стафилококов брой (Staphylococcus aureus).

Състои се от казеинов панкреатичен хидролизат, екстракт от месо, екстракт от дрожди, литиев хлорид, глицин, натриев пируват, калиев телурит, агар и емулсия от яйчен жълтък..

Агарът Baird Parker се основава на способността на S. aureus за намаляване на телурита и производство на лецитиназа. И двете свойства генерират колония със специфични характеристики за този вид. Следователно, той предлага голяма ефективност при откриването на този микроорганизъм.

Типичните колонии на S. aureus те са черни или тъмно сиви, с безцветна граница и ясен ореол, който ги заобикаля, като се отличават от останалите микроорганизми. Този патоген може да бъде намерен в клинични проби, води, козметика и сурови или готвени храни.

Неговата диагноза или откриване е много важно, поради разнообразието от патологии, които тя произвежда, като хранително отравяне, попарен кожен синдром, синдром на токсичен шок, абсцеси, менингит, септицемия, ендокардит и др..

индекс

• 1 Фондация
  • 1.1 Хранителна мощност
  • 1.2 Селективен
  • 1.3 Диференциал
• 2 Подготовка
  • 2.1 Емулсия от яйчен жълтък
  • 2.2 Калиев телурит при 1% w / v
  • 2.3. Получаване на хранителната среда
• 3 Използвайте
  • 3.1 Клинични проби
  • 3.2 Хранителни проби
  • 3.3 Водни проби
• 4 Контрол на качеството
• 5 Препоръки
• 6 Препратки

фундамент

Хранителна сила

Казеинов панкреатичен хидролизат, екстракт от месо и екстракт от дрожди са източниците на хранителни вещества, витамини и минерали, необходими за общото микробно развитие, докато пируватът и глицинът са съединения, които благоприятстват специфичния растеж на Staphylococcus aureus.

селективен

Агарът Baird Parker е селективен, защото съдържа вещества, които възпрепятстват растежа на съпътстващата флора, като същевременно насърчават развитието на S. aureus. Инхибиращите съединения са литиев хлорид и калиев телурит.

диференциал

Това означава да се разграничи S. aureus на останалата част от коагулазните отрицателни стафилококи. S. aureus има способността да редуцира телурита до черен метален свободен телур, образувайки черни или тъмно сиви колонии.

По същия начин, яйчният жълтък осигурява на субстратите доказателство за присъствието на ензима лецитиназа и липаза. S. aureus това е положителна лецитиназа и следователно около колонията ще се наблюдава ясен ореол, което показва, че лецитинът е хидролизиран.

В този смисъл появата в този агар на черни или тъмно сиви колонии, ярки със светло ореол, показват наличие на S. aureus. 

Ако се образува зона на утаяване, е показателно, че има липазна активност. Някои щамове на S. aureus те са положителни липази и други отрицателни.

В случай, че S. aureus Ако липазата е положителна, около черната или тъмносивата колония ще се наблюдава непрозрачна зона, а след това ясният хало, поради действието на лецитиназа..

Колонии на бактерии, различни от S. aureus може да расте в тази среда, ще се развият безцветни или кафяви колонии, без ореол.

Атипични черни колонии могат също да бъдат наблюдавани с или без безцветна граница, но без ясен ореол. Тези колонии не трябва да се вземат предвид, те не съответстват S. aureus.

подготовка

Емулсия от яйчен жълтък

Вземете прясно пилешко яйце, измийте го добре и го сложете 2 до 3 часа в 70% алкохол. След това яйцето се отваря асептично и яйчният белтък се отделя внимателно от жълтъка. След това се вземат 50 ml жълтък и се смесват с 50 ml стерилен физиологичен разтвор.

Калиев телурит при 1% w / v

Някои търговски къщи продават готов за употреба 1% калиев телурит. Той се добавя към средата, преди средата да се втвърди.

За приготвяне на този разтвор в лабораторията се претегля 1,0 г калиев телурит и се разтваря в част от водата. След това количеството на водата се допълва до 100 ml. Разтворът трябва да бъде стерилизиран чрез филтрационен метод.

Приготвяне на културална среда

Претеглят се 60 g от дехидратираната среда и се разтварят в 940 ml дестилирана вода. Оставете сместа в покой за около 5 до 10 минути.

Прилагайте топлина, като разбърквате средата често, за да подобрите процеса на разтваряне. Оставете да ври за минута. Стерилизирайте в автоклава при 121 ° С за 15 минути.

Оставете да престои, докато достигне температура от 45 ° C и добавете 50 ml емулсия на жълтъка и 10 ml 1% телурит. Разбъркайте добре и подайте 15 до 20 ml върху стерилни петриеви блюда.

Оставя се да се втвърди, да се поръча обърната в плакери и да се съхранява в хладилник до употреба.

Крайното рН на приготвената среда трябва да бъде 6.8 ± 0.2.

Преди да засадите проба, изчакайте, докато плочата попадне на околната температура. Посейте плочите чрез накисване или чрез засяване на повърхността с шпатула Drigalski.

Цветът на дехидратираната среда е светлокафяв, а цветът на подготвената среда е светло кехлибарено.

употреба

Клинични проби

Клиничните проби се посяват директно чрез изхвърляне на част от материала в единия край на плочата и оттам се изсмукват. Инкубира се в продължение на 24 до 48 часа при 35-37 ° С.

Хранителни проби

Претеглят се 10 g от хранителната проба и се хомогенизират в 90 ml 0.1% peptonated вода, от там се приготвят разреждания, ако е необходимо. Плаките се инокулират в три екземпляра с 0,3 ml от приготвените разтвори и се засяват на повърхността с шпатула Drigalski. Инкубира се в продължение на 24 до 48 часа при 35-37 ° С.

Тази методология позволява да се преброят типичните получени колонии и е идеален при наличие на S. aureus над 10 CFU на g / ml проба.

Ако подозирате, че размерът на S. aureus тя е малка или има много придружаваща флора, препоръчва се пробата да се обогати в трифтаза соев бульон с 10% NaCl и 1% натриев пируват. Това ще благоприятства растежа на S. aureus и ще попречи на развитието на съпътстващата флора. Тръбите, които са мътни, ще бъдат посяти на агар от Baird Parker.

Водни проби

В вакуумно филтрираща система и стерилизирана, 100 ml вода се филтрува и след това микрометровата мембрана от 0.4 микрона се отстранява със стерилна скоба и се поставя върху плаката на Baird Parker. Инкубира се за 24 до 48 часа при 35-37 ° С. Тази техника позволява преброяването на типичните колонии на S. aureus.

Контрол на качеството

За да се оцени качеството на Baird Parker агар, могат да се използват известни щамове, като например Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 или Proteus mirabilis ATCC 43071.

В случай на щамове на. \ T S. aureus Известно е, че АТСС намалява телурита и те са положителна липаза и лецитиназа. Следователно трябва да има задоволително развитие и да се развиват изпъкнали колонии с черен център и безцветен ръб, с непрозрачен ореол и друг ореол по външен вид..

От друга страна, S. epidermidis в тази среда се очаква слабо развитие, със сиво-кафяви до черни колонии, без ясен ореол.

за Е. coli и P. mirabilis очаква се то да бъде напълно или частично потиснато. В случай на отглеждане, кафявите колонии ще се развиват без непрозрачна зона, нито ясен ореол.

препоръки

-Средата не трябва да се нагрява след добавяне на телурита и жълтъка.

-Приготвянето на емулсията от яйчен жълтък и добавянето му в средата е много уязвим етап на замърсяване. Трябва да се обърне изключително внимание.

-Ако има наличие на типични колонии от S. aureus трябва да се потвърди чрез монтиране на коагулазен тест към споменатия щам.

-Ако има съмнителни резултати с коагулаза, трябва да бъдат монтирани други потвърждаващи тестове.

-Внимавайте да не объркате присъствието на типични колонии на S. aureus с атипичните колонии от черен цвят.

препратки

1. Уикипедия. Агар от Baird-Parker. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 15 март 2017 г., 19:36 UTC. Достъпни на: wikipedia.org/ Достъп 18 февруари, 2019.
2. BD Laboratories. Агар на Бейрд Паркър. 2006. Налично на: bd.com
3. Laboratories Britania. Агар на базата на Baird Parker. 2015. Налично на: britanialab.com
4. Лабораториите на Франсиско Сория Мелгизо. 2009. Агар на Байрд Паркър. Достъпни на адрес: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratories Britania. Калиев телурит. 2015. Налично на: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Staphylococcus aureus ентеротоксигенен тип А, в назофарингеалните намазки в хранещите се с храна. Rev Med Чили 2017; 145: 1559-1564
7. Венецуелски стандарт Ковен 1292-89. (1989). Храните. Изолация и броене Staphylococcus aureus. Предлага се в:sencamer.gob.ve