Агар BHI основа, подготовка и употреба



на BHI агар или агар с инфузия на мозъчно сърце е хранителна твърда хранителна среда. На испански го наричаме агар с инфузия на мозъчно сърце. Това е неселективна културна среда, което означава, че могат да се развиват всички видове Грам-положителни и Грам-отрицателни бактерии, както и някои дрожди и нишковидни гъби..

Състои се от телесна мозъчна и сърдечна инфузия, пептичен хидролизат на животински тъкани, казеинов панкреатичен хидролизат, натриев хлорид, глюкоза, динатриев фосфат и агар..

Трябва да се отбележи, че BHI агарът е една от най-честите хранителни среди в бактериологичните лаборатории. Може да се използва без добавки като първична култура, субкултура на колонии, получени в други селективни среди или за поддържане на щамове в лабораторията..

От друга страна, той е идеална среда, която трябва да се използва като основа при приготвянето на обогатена среда, такава като кръвен агар и шоколадов агар. И двете са идеални за изолиране на взискателните микроорганизми от хранителна гледна точка. Трябва да се има предвид обаче, че тъй като съдържа глюкоза, не е достатъчно да се наблюдават моделите на хемолиза.

Аналогично, BHI агар може да се използва за приготвяне на специални средства за изолиране на патогенни микроорганизми с труден растеж в обичайни среди, сред които: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae и Histoplasma capsulatum.

С антибиотичната добавка BHI агарът става селективна среда за изолиране на гъбички.

индекс

  • 1 Фондация
  • 2 Подготовка
    • 2.1 Клинове
    • 2.2 Плочи
    • 2.3 Приготвяне на кръвен агар
  • 3 Използване
    • 3.1 Използвайте без добавки
    • 3.2 Като основен агар за получаване на други среди
  • 4 Контрол на качеството
  • 5 Препратки

фундамент

Това е хранителна среда за изолиране на умерено взискателни микроорганизми, способни да увеличат обогатяването си с добавка на кръв и други хранителни добавки..

Това е неселективна културална среда, поради което позволява растежа на повечето грам-положителни и грам-отрицателни бактерии, както и някои гъби. Въпреки това, той може да стане селективен с добавянето на антибиотици.

Средата съдържа инфузия на телешки мозък и сърце, пептиден хидролизат от животински тъкани и казеинов панкреатичен хидролизат; всички тези съединения действат като източници на витамини, аминокиселини, азот и въглерод.

Глюкозата е въглехидрат, който осигурява енергия на микроорганизмите, след като я ферментират. Докато натриевият хлорид и динатриевият фосфат поддържат осмотичното равновесие и осигуряват рН в близост до неутралност. Накрая, агарът дава твърдата консистенция на средата.

подготовка

Претеглят се 52 грама от дехидратираната среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Сместа се довежда до източник на топлина, докато кипи, като се разбърква често по време на процеса на разтваряне.

Можете да приготвите клинове или плочи от BHI агар без добавки.

клинове

За приготвяне на клинове се подготвя до пълнене на половината от всяка епруветка, покрива се и се стерилизира в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути, когато излиза да лежи на основата, докато се втвърди. След това съхранявайте в хладилник до употреба.

плаки

Разтворената смес се автоклавира при 121 ° С в продължение на 15 минути, след като се остави да се охлади до 50 ° С и 20 ml от средата се подават в стерилни петриеви блюда. Те се оставят да се втвърдят, да се обърнат и да се съхраняват в хладилник, докато се използват. Оставете плочките да приемат стайна температура преди засаждане.

РН на средата трябва да бъде 7.4 ± 0.2.

Неподготвената среда е бежова и подготвена е светло кехлибарено.

Приготвяне на кръвен агар

След стерилизиране на средата, охлажда се до температура от приблизително 45 до 50 ° С, към това време се добавя кръвта (50 ml), разбърква се внимателно, за да се хомогенизира и асептично се подават 20 ml във всяка петриева паничка. Ако на плаката се образуват мехурчета, пламъкът на горелката трябва бързо да се премине през мехурчетата, за да ги отстрани.

По същия начин могат да се приготвят специални среди чрез добавяне на съответните добавки, когато сместа достигне температура от 45 до 50 ° С.

Средата е червено-черешово.

приложения

Използвайте без добавки

BHI агар без добавки е полезен като първична култура и за засаждане на чисти щамове микроорганизми, които са средни или умерено изискващи за по-късна идентификация.

Тъй като е светло оцветена среда, тя е идеална за наблюдение на пигменти, а също и защото не съдържа намеса, може да се използва за извършване на биохимични тестове, като оксидаза и каталаза, или за монтиране на други биохимични тестове от колонии, произхождащи от тази агар.

Аналогично, BHI агарните клинове са широко използвани за поддържане на щамове за определено време в лабораторията (бактериотека).

Плаките или клинове, засадени на повърхността с бактериални щамове, се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 до 48 часа. Докато при гъбичките температурата и времето за инкубация ще зависят от вида на търсената гъба.

Като основен агар за получаване на други среди

С тази основа могат да се приготвят обогатени и селективни среди.

обогатен

Неговата основна функция е да служи като основа при подготовката на кръвен агар за рутинна употреба в микробиологични лаборатории. По-специално, BHI базата води до изолиране на щамове на Streptococcus sp. Обаче, той има недостатъка, че не е подходящ за наблюдение на моделите на хемолиза, тъй като съдържа глюкоза.

Също така се използва при приготвянето на заек или конски кръвен агар за изолиране на Haemophilus sp. За по-добри резултати можете да добавите добавка за обогатяване (IsoVitaleX).

Ако пробите идват от дихателния тракт към агара, може да се добави бацитрацин, за да се инхибира съпътстващата флора и да се увеличи вероятността за възстановяване на щамовете на Haemophilus sp.

От друга страна, кръвен агар (агнешко или човешко) може да бъде приготвен с телуритен цистин, за да се изолира Corynebacterium diphtheriae. По същия начин е полезно да се приготви заек от кръвен агар с добавянето на цистин и глюкоза за изолиране на Francisella tularensis.

Засяването на плочките от кръвен агар се извършва чрез изчерпване и се инкубират при 35-37 ° С в продължение на 24-48 часа в микроаерофилни (5-10% СО).2).

селективен

Тази среда с добавка на антибиотици може да замени Sabouraud агар за изолиране на гъбички.

Комбинацията от BHI агар с хлорамфеникол - гентамицин или пеницилин -, стрептомицин и конска кръв е идеална за изолиране на Histoplasma capsulatum.

В зависимост от микроорганизма, който се изолира, се препоръчва инкубация при 35-37 ° C или при стайна температура при аеробиоза. Понякога инкубацията е необходима и в двата температурни диапазона, като се използват 2 плаки за това.

Някои гъби харесват Trichophyton mentagrophytes те трябва да бъдат инкубирани при стайна температура до 7 дни.

Контрол на качеството

От всяка приготвена партида се препоръчва инкубиране на 1 плака или клин при 37 ° С за 24 часа и се проверява дали няма растеж; Особено важно е при приготвянето на кръвен агар, защото той е лесно замърсена среда.

От друга страна, качеството на средата може да бъде оценено чрез инокулиране на известни или сертифицирани стандартни щамове и наблюдение на тяхното развитие.

В този смисъл, за оценка на BHI агар без добавки, щамове на Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 или Candida albicans АТСС 10231. Те ​​се инкубират при 37 ° С в аеробиоза за 24 до 48 часа. Във всички случаи се очаква задоволителен растеж.

За оценка на кръвните агарни плаки, щамове на  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 или Trichophyton mentagrophytes АТСС 9533.

Бактериалните щамове се инкубират при 37 ° С в microaerophilicus за 24 часа, докато гъбичката се инкубира при стайна температура във влажна камера до 7 дни. Във всички случаи се очаква задоволителен растеж.

препратки

  1. Laboratories Britania. Мозъчен инфузионен агар. 2015. Налично на: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Агара на мозъчната инфузия (BHI). 2013. Налично на: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Мозъчен инфузионен агар. 2009.
  4. Neogen лаборатория. Мозъчен инфузионен агар. Предлага се на адрес: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Агар кръв: основа, употреба и подготовка. 2018. Предлага се на адрес: lifeder.com.
  6. Уикипедия. Мозъчна инфузия на сърцето Уикипедия, Свободната енциклопедия. 19 септември, 2018, 03:58 UTC. Достъпни на: wikipedia.org. Достъп до 2 март, 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.