Основа на лактозадния бульон, препарат и приложения



на бульон от лактоза е течна, неселективна културална среда, използвана главно като среда за предварително обогатяване при изолирането на щамове на Salmonella от микробиологичен анализ, извършен върху преработени храни, млечни продукти или вода. Това се препоръчва от Международната комисия за микробиологични спецификации за храните (ICMPF).

Средата съдържа ензимно смилане на желатин, месен екстракт и лактоза, вещества, необходими за растежа на бактериите. Освен това лактозата е ферментирала въглехидрата, така че някои колиформи могат да се разделят с производството на газ.

Поради тази причина лактозният бульон се препоръчва от Американската асоциация за обществено здраве (APHA) за предполагаемо проучване на тотални и фекални колиформни бактерии, което го квалифицира като отлична алтернатива да замени лаурилсулфатния триптозен бульон в стандартната техника на най-вероятния брой (NMP). ), използвани за микробиологичен анализ на проби от храни, мляко и повърхностни води, подземни, рекреационни, битови и промишлени отпадъци.

индекс

  • 1 Фондация
  • 2 Подготовка
  • 3 Използване
    • 3.1 Предварително обогатяване
    • 3.2 Анализ на общите и фекални колиформи
  • 4 Контрол на качеството на средата
  • 5 Препратки

фундамент

За микробиологичния анализ на някои проби, стъпката на предварителното обогатяване е от съществено значение, за да може да се възстанови специфичен микроорганизъм, който може да бъде в много ниско количество или при неблагоприятни условия, които нарушават или минимизират неговата жизнеспособност..

Такъв е случаят със сухи и преработени храни, евентуално замърсени с Salmonellas sp. В тези случаи, ако бактериите присъстват, те са претърпели физическо и химическо малтретиране по време на производствения процес на продукта..

По такъв начин, че микроорганизмите са изложени на неблагоприятни фактори, като дехидратация, излагане на инхибиторни или токсични продукти, и на припокриване, генерирано от присъствието на други бактерии в по-голямо количество, между другото..

В този смисъл, лактозният бульон има възстановяващ ефект върху увредените структури на микроорганизма, причинявайки го да се възстанови и възпроизведе по такъв начин, че да може да бъде открит..

По същия начин, лактозният бульон има способността да разрежда инхибиращите вещества, които могат да повлияят на неговата жизнеспособност, позволявайки неговото развитие. В допълнение, хранителният състав на лактозния бульон е стратегически в полза на растежа на Salmonella sp над други микроорганизми.

За окончателното идентифициране, той трябва да бъде култивиран към други средства за окончателни култури.

От друга страна, съставът на средата също позволява да се открият микроорганизми за ферментация на лактоза, които произвеждат газ.

подготовка

За да се приготви един литър бульон от лактоза, се претеглят 13 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1000 ml дестилирана вода.

За да разтворите средата във водата, можете да загреете разтвора малко, но не прекалено много..

Веднъж хомогенен, разтворът се приготвя по следния начин: ако бульонът се използва за търсене на колиформи, се приготвя стелаж с епруветки и се поставя Durham ферментационна тръба..

Тръбата на Дърам е много важна детайл, защото ще позволи да се открие образуването на газ, ценни данни при търсенето на колиформи.

Когато тръбите са готови, 10 ml от лактозния бульон се разпределят в тях, което трябва да е достатъчно, за да покрие цялата тръба на Durham..

Ако бульонът на лактозата ще се използва като бульон за предварително обогатяване, не е необходимо да се поставя Durham ферментационна тръба. В този случай е необходимо по-голямо количество среда (225 ml), което ще се сервира в бутилки от 500 ml, широка уста и с термоустойчива винтова капачка..

След това епруветките или колбите се поставят в автоклава при 121 ° С в продължение на 15 минути.

Средата трябва да остане при крайно рН 6,9 ± 0,2 при 25 ° С.

Вината се съхраняват в хладилник, докато се използват.

Преди употреба, бульоните трябва да се темперират при стайна температура.

От друга страна, лактозният бульон може също да бъде приготвен при двойна концентрация.

Някои лаборатории добавят бромкрезолово лилаво към бульона на лактозата като индикатор за рН, за да покажат тръбите, където е имало ферментация на лактоза чрез промяна на цвета. В този случай бульонът е с пурпурен цвят и ако ферментацията стане жълта.

приложения

В микробиологичните лаборатории лактозният бульон се използва широко като сравнително евтина среда, която предлага надеждни и бързи резултати (24-48 часа).

Може да се използва за анализ на тотални и фекални колиформни форми във вода и храна или като предварително обогатяващ бульон за Salmonella.

Preenrichment

Предварителното обогатяване е стъпка преди обогатяването на пробата, което значително подобрява възстановяването на бактериите от рода Salmonella в преработени храни.

За да се направи това, пробата от твърдата храна (25 грама) или течност (25 ml) се посява в 225 ml лактозен бульон и се инкубира за 24 до 48 часа. Впоследствие, селенитният цистинов бульон или тетратионатен бульон ще бъдат субкултивирани в обогатена среда. След това преминава към селективни медии XLD и SS.

Анализ на общите и фекални колиформи

Това е отлично средство като индикатор за фекално замърсяване.

Следователно, лактозният бульон е идеален за предполагаемата фаза на колиформното изследване по метода на най-вероятния брой..

За проби, за които има съмнение за голямо количество колиформи, ще се инокулира по-малко количество колиформни бактерии (1 ml), докато за проби, за които има съмнение за по-малко количество колиформи, се инокулира повече обем (10 ml)..

Направени са 10 разреждания за анализа-1, 10-2, 10-3, формиране на батерия с 3-5 тръби за всяка използвана концентрация.

От всяко разреждане се засява същият обем на лактозния бульон.

Епруветките се инкубират в продължение на 24 часа. Отрицателните бульони се инкубират още 24 часа.

Интерпретацията на резултатите се постига чрез спазване на две характеристики: първата е наличието или отсъствието на мътност и тъй като тази среда не съдържа индикатор за рН, няма да има промяна в цвета.

Вторият е производството или не на газ. Газът се демонстрира лесно в тръбата на Дърам, чрез появата на един или повече мехурчета вътре.

Счита се положително, ако се наблюдават и двете характеристики, т.е. мътност при производството на газ. Положителните епруветки трябва да бъдат повторно засети в потвърждаваща среда (бульон Brilliant Green 2% жлъчен и EC бульон).

Контрол на качеството на средата

- При подготовката на средата е важно да не забравяме да поставяме тръбите Durhams, ако целта на същото е изследването на колиформните бактерии..

- Не прегрявайте средата преди стерилизиране.

- Разпределете в епруветки преди стерилизация, никога след това.

- Не използвайте, ако средата има повече от 3 месеца подготовка.

- Не използвайте, ако забележите някаква промяна в обичайните характеристики на средата.

- Когато се приготвя партида от бульон от лактоза, тествайте качеството му чрез засаждане на щамове, известни като Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii и Klebsiella pneumoniae. Те растат много добре, с производство на газ (положителен контрол).

- Може също да включва Pseudomonas aeruginosa, салмонела Typhimurium или Enterococcus faecalis, които растат добре, но без производство на газ (отрицателен контрол).

- Трябва да се отбележи, че първоначалният цвят на дехидратираната среда е бежова и тази на получената среда е много бистра и прозрачна жълта. Ако има промяна в цвета или външния вид, може да има влошаване на същия.

препратки

  1. Acevedo R, Severiche C, Кастило М. Биология и микробиология на околната среда. (2013) 1-во издание. Университет в Cartagenas, Колумбия.
  2. Камачо А, Джайлс М, Ортегон А, Палао М, Серано Б и Веласкес О. (2009). Техники за микробиологичен анализ на храните. 2nd ed. Химически факултет, UNAM. Мексико.
  3. Лаборатории Конда Пронадиса. 2017. Двойна концентрация на лактозен бульон (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Сравнение на техниките за извличане на колиформни бактерии от езерен седимент на Xochimilco, Мексико. Rev. argent. Microbiol.  2013; 45 (3): 180-184. Достъпни на: scielo.org.
  5. Сотомайор Ф, Вилагра V, Кристалдо Г, Силва Л., Ибанес Л. Определяне на микробиологичното качество на артезианските кладенци в областите на централните, централните и столичните общини. Изм. Cienc. здраве 2013; 11 (1): 5-14. Предлага се от: scielo.iics.