Основа, подготовка и употреба на бульон EC

на EC бульон или бульон Escherichia coli Това е селективна течна хранителна среда. Тази среда се препоръчва от стандартните методи за преброяване на общите и фекални колиформни бактерии, по техника на най-вероятния брой (NMP) във вода и проби от храни, където основният включен агент е Escherichia coli.

EC бульон се състои от triptein, лактоза, жлъчни соли, дикалиев фосфат, монокалиев фосфат, натриев хлорид и вода. Неговата формула е стратегически разработена, за да благоприятства растежа на тотални и фекални колиформи и да предотврати развитието на други съпътстващи микроорганизми..

Бактерията Escherichia coli е основният фекален колиформ, присъстващ като замърсител във водата и хранителните източници, причинявайки важни стомашно-чревни образи.

Трябва да се отбележи, че има много серотипове Escherchia coli; сред тях можем да споменем ентерохеморагичната (EHEC), ентероинвазивната (EIEC), ентеропатогенната (EPEC), ентеротоксигенната (ETEC) и ентероагрегативната (ЕАЕС).

Това означава, че има способността да позволи развитието на всички тях, но без да може да ги разграничи. За тази цел трябва да се извършат допълнителни тестове.

Микробиологичното изследване на водата и храните по най-вероятния брой (NMP) за търсене на тотални и фекални колиформни форми е протокол, който е съобразен с няколко фази; предполагаема фаза, фаза на потвърждение и фаза на приключване. EC бульон се използва в потвърждаващата фаза.

индекс

• 1 Фондация
  • 1.1 EC Broth
  • 1.2 EC бульон, модифициран с новобиоцин
• 2 Подготовка
  • 2.1 EC бульон
  • 2.2 EC бульон, модифициран с новобиоцин
• 3 Използвайте
  • 3.1. Анализ на общите и фекални колиформи
• 4 Контрол на качеството
• 5 Препоръки
• 6 Препратки

фундамент

EC бульон

EC средата се основава на осигуряване на необходимите хранителни елементи за оптимално развитие на тотални и фекални колиформни бактерии, където бактерията е включена Escherichia coli.

Тези хранителни елементи са осигурени от triptein, като отличен източник на пептиди и аминокиселини. Освен това той съдържа лактоза, ферментирала въглехидрат, която осигурява енергия и позволява да се покаже дали бактериите произвеждат газ.

От друга страна, средата съдържа жлъчни соли, които осигуряват селективен характер, тъй като инхибира растежа на грам-положителни микроорганизми, които могат да присъстват в пробата..

По същия начин, дикалиев фосфат и монокалиев фосфат действат като система за балансиране на рН. Тази система е необходима, тъй като съдържащата се в бульона лактоза има склонност да подкислява средата, когато тя ферментира от микроорганизми, но това се компенсира с фосфатни соли..

Следователно, тези елементи са от съществено значение, тъй като неконтролираната киселинност може да повлияе на правилното развитие на търсените микроорганизми.

От своя страна, натриевият хлорид стабилизира средата осмотично, докато водата е разтворител на присъстващите разтвори и осигурява течната консистенция на средата..

EC бульон, модифициран с новобиоцин

Okrend и Rose създадоха разнообразие от EC бульон, наречен EC бульон, модифициран с новобиоцин. Модификацията се състои в намаляване на концентрацията на жлъчните соли и добавянето на 20 mg / dl новобиоцин.

Тази модификация благоприятства възстановяването на щамове на Escherichia coli ентерохеморагичен (O157: H7).

Този бактериален серотип причинява тежък хеморагичен колит, който може да причини хемолитично-уремичен синдром (HUS); което от своя страна може да генерира остра бъбречна недостатъчност, с висока смъртност, която може да достигне до 50% при възрастните хора.

Поради заболеваемостта и смъртността, причинявани ежегодно от тази бактерия, поради консумацията на заразена храна, Министерството на земеделието на САЩ (USDA) широко препоръчва използването на това средство.

подготовка

EC бульон

Претеглят се 37,4 g дехидратирана среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Сместа трябва да се остави да престои 5 минути. Впоследствие, в източник на топлина, се разтваря често.

Веднъж разтворени, той се разпределя в епруветки, предварително кондиционирани с тръба от Durham вътре. Стерилизира се в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути.

РН на средата трябва да бъде 6.9 ± 0.2. Цветът на дехидратираната среда е бежов и подготвен е светло кехлибарено.

Вината се съхраняват в хладилник, докато се използват. По време на употреба бульоните трябва да са при стайна температура.

От друга страна, EC бульонът може също да бъде приготвен при двойна концентрация.

EC бульон, модифициран с новобиоцин

Претеглят се 36,7 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър вода. Останалата част от препарата е същата като описаната по-горе.

употреба

Анализ на общите и фекални колиформи

EC бульонът е идеален за потвърждаващата фаза на изследването на колиформите по метода NMP, както във водни проби, така и във фармацевтични продукти и храни..

Мързеливи бульони, получени в предполагаемата фаза, трябва да бъдат засадени в 2% светлозелена жлъчка и EC бульон.

За тотални колиформни бульони EC се инкубират при аеробиоза за 24 до 48 часа при 37 ° C, а за фекални колиформи те се инкубират в аеробиоза за 24 до 48 часа при 44 ° C..

И в двата случая се тълкува по следния начин: мътните тръби с добив на газ се считат за положителни. Ако за 24 часа няма производство на газ, инкубацията продължава до 48 часа.

EC положителните бульони преминават в пълната потвърждаваща фаза, която се състои в повторно засяване в селективни среди като Mac Conkey агар, EMB агар или Endo агар..

Ако използваният бульон е EC модифициран с новобиоцин, положителните епруветки се препоръчват за повторно засяване върху Mac Conkey агар с сорбитол..

Контрол на качеството

Контролът на качеството трябва да се извършва на всяка партида от подготвена среда. Първо, трябва да се оцени стерилността на средата. В този смисъл, един или два бульона се инкубират без инокулиране в аеробиоза в продължение на 24 часа при 37 ° С. Очакваният резултат е прозрачен бульон, без мътност или промяна на цвета.

Второ, трябва да се оцени растежът на известни щамове, за които могат да се използват следните бактерии: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Във всички случаи се очаква задоволително развитие на микроби, като се наблюдава мътна среда с производство на газ Е. coli и без газ за Salmonella.

Други щамове, които могат да бъдат включени в контрола са: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Тези щамове трябва да бъдат напълно инхибирани.

препоръки

-Поставянето на тръби Durham е от съществено значение за изследването на колиформните форми.

-Разпределете средата в епруветките преди стерилизиране, никога след това.

-Не използвайте, ако средата има повече от 3 месеца подготовка.

-Не използвайте, ако има някаква промяна в обичайните характеристики на средата.

препратки

1. Laboratories Britania. EC Medium. 2015. Налично на: britanialab.com
2. Е. coli enterohemorrhagic. Центърът за продоволствена сигурност и обществено здраве. 2010. Налично на: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Средна ЕО. Предлага се на адрес: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Среда EC модифицирана с новобиоцин. Предлага се на адрес: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Откриване, изолиране и характеризиране на Escherichia coli производител на токсин Shiga от прясно смляно говеждо месо от месарски магазини в Concepción, провинция Tucumán. Rev Microgol by Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Достъпни на адрес: www.scielo.org.