Основа, приготвяне и употреба на бульон селенит



на бульон от селенит Това е селективна течна хранителна среда. Той е проектиран от Leifson за обогатяване на проби, за които се подозира наличието на ентеропатогенни бактерии от рода Salmonella..

Тази среда отговаря на изискванията на Американската асоциация за обществено здраве (APHA) и поради това е приета за изследване на наличието на Salmonella в проби от изпражнения, урина, течни или твърди храни, вода, между другото..

Химичният състав, който притежава, благоприятства възстановяването на тези микроорганизми и от своя страна потиска растежа на други. Той е предимно токсичен за повечето бактерии, принадлежащи към семейство Enterobacteriaceae. Обаче, той също така позволява възстановяването на щамовете на Shigella и не инхибира растежа на Pseudomonas и Proteus..

Състои се от безводен натриев водороден селенит, безводен натриев фосфат, пептони и лактоза. Има и вариант, към който се добавя цистин, откъдето идва и името му селенит-цистинов бульон.

Понастоящем се предпочита използването на селенит-цистинов бульон, тъй като се получава по-висок процент на възстановяване на Salmonella, еквивалентен на този, наблюдаван с други селективни среди с една и съща цел, като бульон от тетратионат натрий..

индекс

  • 1 Фондация
  • 2 Подготовка
    • 2.1 - Селена
    • 2.2 - Подготовка на търговската среда
    • 2.3 Вариант на селенит-цистинов бульон
  • 3 Използване
  • 4 Размножена
  • 5 Контрол на качеството
  • 6 Ограничения
  • 7 Препратки

фундамент

Пептоните, съдържащи се в бульона, служат като хранителни вещества за правилното развитие на микроорганизми. Щамовете Salmonella използват пептони като източник на азот, витамини и аминокиселини.

Лактозата е ферментиралата въглехидрата, докато натриевият селенит е инхибиращото вещество, което забавя растежа на грам-положителните бактерии и повечето бактерии, присъстващи в чревната флора, особено в семейството на Enterobacteriaceae. Натриевият фосфат е буфер, който стабилизира рН на средата.

В случая на варианта на селенитния бульон, съдържащ L-цистин, това допълнително съединение е редуциращ агент, който минимизира токсичността на селенит, увеличавайки възстановяването на Salmonella.

подготовка

-Селенитен бульон

Ако имате компонентите на сместа, можете да претеглите:

4 g безводен натриев водороден селенит.

10 g безводен натриев фосфат.

5 гр пептона.

4 g лактоза.

Съединенията се разтварят в 1 литър стерилна дестилирана вода. Тя може да се нагрее леко, за да се разтвори изцяло.

Някои лаборатории излагат средата в продължение на 10 минути в добра пара, за да я стерилизират, тъй като автоклавът не трябва да се използва. Ако средата се стерилизира, тя може да се съхранява в хладилник, докато се използва.

Може да се приготви и без стерилизиране и директно подаване на 10 до 15 ml в стерилните епруветки.

В този случай трябва да се остави да почива и да се използва незабавно. Тъй като средата не е стерилна, тя не може да се съхранява в хладилник за по-късна употреба.

-Приготвяне на търговската среда

Ако търговската среда е налична, 23 g от дехидратираната среда се претеглят и се разтварят в един литър стерилна дестилирана вода. Загрейте за кратко, за да завършите разтварянето. Не стерилизирайте в автоклав. Сервирайте асептично 10 или 15 ml в стерилни епруветки.

Крайното рН на средата трябва да бъде 7.0 ± 0.2.

Трябва да се отбележи, че цветът на дехидратираната среда е бежово и препаратът е бистър и прозрачен кехлибарен.

Вариант селенит-цистинов бульон

Той съдържа същите съединения от селенния бульон, но се добавят 10 mg цистин. Останалата част от процедурата е същата като описаната по-горе.

приложения

Тази среда е специална, за да се използва в епидемиологични проучвания, в случаите, когато заболяването не е в стадия на острата фаза, асимптоматични пациенти или здрави носители..

Изолирането на рода Salmonella обикновено е трудно, тъй като обикновено се открива, че те замърсяват пробите по ограничен начин. Да бъдеш в малки количества лесно се застъпва от растежа на други бактериални родове, които се намират в по-голямо количество.

От друга страна, суровината, с която се обработват преработените храни, често е изложена на топлина, на процеси на дехидратация, на използването на дезинфектанти, радиация и консерванти, наред с други..

Следователно салмонелите, присъстващи в суровината, се третират погрешно чрез подаването на продукта към гореспоменатите промишлени процеси. По същия начин, в случай на клинични проби като фекалии, щамовете могат да бъдат слаби, ако идват от пациенти, които са били лекувани с антибиотици..

Следователно всяка проба, в която се предполага наличието на Salmonella, трябва да бъде предварително обогатена с бульон от лактоза и след това да бъде обогатена с бульон от селенит, за да се оптимизира нейното възстановяване в селективни среди, като SS агар, ксилозен агар, лизин деоксихолат (XLD) ), ентеричен хектоен агар (HE) и зелено-ясен агар, наред с други.

засадени

За проби от изпражнения се взимат 1 g проба и се суспендират в епруветка с 10 до 15 ml селенищен бульон. Ако изпражненията са течни, вземете 1 ml и суспендирайте в бульон. За ректални тампони изхвърлете тампония материал в бульон.

В проби от твърди храни вземете 1 гр и суспендирайте в селенитния бульон.

В течни храни се смесват в равни части със селеновия бульон при двойна концентрация.

За центрофугиране на проби от урина, изхвърлете супернатантата, вземете цялата утайка и я суспендирайте в бульон от селенит..

Бульдовете се инкубират при 37 ° С за 24 часа инкубация. Бактериалният растеж се доказва от мътността. Допълнителна тръба за проба може също да бъде включена за инкубиране при 42 ° С. Впоследствие сеят селективна твърда среда от селенитния бульон.

Контрол на качеството

За контролиране на стерилността селенният бульон от всяка партида без инокулация се инкубира при 37 ° С за 24 часа. Очаква се, че няма замъгляване или промяна на цвета на средата.

За да се контролира доброто функциониране на средата, могат да се използват известни щамове, като:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 и Proteus mirabilis ATCC 43071.

Очакваните резултати са:

  • За първите три бактериални щама растежът трябва да бъде задоволителен.
  • за Escherichia coli частично инхибиране.
  • За Proteus умерен растеж.

ограничения

Средният бульон от селенит е токсичен за човешката кожа, затова трябва да се избягва директен контакт.

препратки

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Сравнение между културална среда на натриев селенит и тетратионат на натрий, инкубирани при 37 ° С и 42 ° С за изолацията на салмонела изпражненията на изпражненията. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratories Britania. Селенито Калдо. 2015. Налично на: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories Selenito бульон Предлага се на адрес: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández-Aguirre E, Villarreal-Camacho J. Микробиологична изолация на Salmonella spp. и молекулярни инструменти за нейното откриване. Здраве, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Предлага се от: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.