Дял:
Основа за използване на агаров шоколад, употреба и подготовка
на шоколадов агар това е твърда, обогатена, неселективна и недиференциална културална среда. Използва се главно за изолиране на микроорганизми, които изискват хранителна гледна точка, въпреки че може да расте всякакъв вид бактерии..
Ето защо неговата полезност се увеличава особено при засяването на проби, които са нормално стерилни, като CSF и ставна течност. Въпреки че е включен и в средствата, избрани за засяване на полимикробни проби, но в тези случаи е необходимо да се добавят антибиотици, които инхибират съпътстващата флора.
Тази среда има характерен кафяв цвят, много подобен на шоколада, откъдето идва и името му. Препаратът е много подобен на кръвния агар, само в този случай кръвта трябва да се загрее, за да се разкъсат червените кръвни клетки.
Неговата подготовка, подобно на кръвен агар, е много деликатна, тъй като е лесно замърсена. Поради тази причина много лаборатории предпочитат да придобият тази среда вече подготвена от търговски къщи, които гарантират тяхното качество.
индекс
- 1 Фондация
- 2 Използване
- 2.1 Шоколадов агар, приготвен с агар на Columbia
- 2.2 Шоколадов агар, приготвен с GC база агар (за гонококи)
- 2.3 Шоколадов агар, приготвен с агар от Müeller Hinton
- 2.4 Шоколадов агар, приготвен с агар от Thayer Martin
- 3 Подготовка
- 3.1 Изчисления
- 3.2 Претегля се и се разтваря
- 3.3 Стерилизиране
- 3.4 Агрегиране на кръв
- 3.5 Друг начин за приготвяне на шоколадов агар без използване на кръв
- 4 Контрол на качеството
- 5 Препратки
фундамент
Тази среда се състои от основа от агар, богата на хранителни вещества и нагрята кръв. Хемолизата на червените кръвни клетки осигурява фактор Х (хемин) и фактор V (NAD), които са необходими за растежа на някои микроорганизми, като рода. Haemophilus. Също така е много полезно за изолирането на Neisserias sp.
Подобно на кръвен агар, могат да се използват различни среди като основен агар в зависимост от необходимостта. Сред използваните медии са инфузия на мозъчна сърцевина и соев агар триптиказ, въпреки че най-препоръчителните са Колумбийският агар, Müeller Hinton, GC агар и Thayer Martin агар..
Някои варианти на шоколадов агар включват търговски налични обогатени добавки, наречени Isovitalex или Polivitex.
Тези добавки съдържат витамин В12, L-глутамин, аденин, гуанин хидрохлорид, р-аминобензоена киселина, никотинамид аденин динуклеотид (NAD), тиамин пирофосфат, железен нитрат, тиамин хидрохлорид, цистеин хидрохлорид, L-цистин и глюкоза.
Важно е да се отбележи, че шоколадовия агар е по-обогатен от кръвния агар, но не позволява наблюдение на моделите на хемолиза..
приложения
Шоколадов агар, приготвен с алуминий Columbia
Тази среда съдържа казеин и разграден сърдечен панкреас, усвоен месен пептид, натриев хлорид, агар, екстракт от дрожди и царевично нишесте. Богат е на витамини, минерали и незаменими аминокиселини.
Тази основа с нагрята кръв е идеална за изолиране на бактерии от рода Neisseria. От друга страна, ако към средата се добави добавка за Brucella, гореспоменатият микроорганизъм може да бъде изолиран. Резултатите се подобряват при използване на конска кръв.
Шоколадов агар, приготвен с GC база агар (за гонококи)
Тази среда съдържа пептони, царевично нишесте, едноосновни и двуосновни буфери, натриев хлорид и агар.
Повечето търговски подготвени шоколадови агарни презентации идват с тази основа и не съдържат нагрята кръв, а синтетична смес от хемин и химическа добавка на растежни фактори, витамини, минерали, аминокиселини, фактор V и глюкоза..
Шоколадов агар, приготвен с агар от Müeller Hinton
Използва се за провеждане на тест за антимикробна чувствителност на взискателни микроорганизми, като например Streptococcus pneumoniae при използване на 5% нагрята кръв.
Той също така служи за първична изолация на Neisserias и Haemophilus, но в конкретния случай на изолиране на Haemophilus Предпочита се използването на конска кръв, тъй като тя е богат източник на фактор X и V.
От друга страна, ако пробата, която се посява, идва от нестерилна област, се препоръчва добавянето на антибиотици да инхибира нормалната флора на района..
Пример за респираторни проби, за които се подозира наличието на бактерии от рода Haemophilus Бацитрацинът се използва за инхибиране на растежа на Стафилококи, микрококи, стрептококи и сапрофитни Neisseria.
В случай на проби от генитален шанкр, където има съмнение Haemophilus ducreyi, Успешно е използван шоколадов агар, приготвен по следния начин: агар Мюлер-Хинтон с 5% конюйна кръв от шоколади, 1% обогатяване с Isovitalex и 3 μg / ml ванкомицин.
Шоколадов агар, приготвен с агар Тейер Мартин
Тази среда е специална за изолацията на Neisseria gonorrhoeae. Той трябва да съдържа антибиотици, за да инхибира съпътстващата флора. Използва се агнешка кръв.
подготовка
Трябва да се видят индикациите за приготвяне на основния агар. Те са на гърба на опаковката на дехидратираната среда. Те обикновено описват колко трябва да се претегля, за да се приготви един литър хранителна среда.
В лабораторията можете да приготвите точно необходимото количество, което може да бъде повече или по-малко от един литър.
изчисления
Правило от три се прави, за да се изчисли колко трябва да се претегли, за да се подготви желаният обем. например:
Ако за 1 литър е необходимо да тежи 40 гр. И лабораторията изисква 800 мл, се казва:
1000 ml -40 gr
800 ml - X
Формулата ще бъде както следва:
X = 32 g (теглото на 800 ml).
Претегля се и се разтваря
Продължаваме да претегляме необходимото количество и го поставяме във фиола с вода.
Загрява се до умерено нагряване и се смесва внимателно с въртеливи движения, докато дехидратираната среда се разтвори напълно, оставяйки я да кипи 1 минута.
стерилизирам
Фиола се въвежда в автоклава, за да се стерилизира средата при 121 ° С в продължение на 20 минути.
Състав на кръв
При напускане на автоклава се оставя да почива, докато температурата на средата е приблизително между 56 и 70 ° C, за да се постави кръвта и да се разбърка, докато средата стане кафява..
Ако ще добавите добавки, това е моментът да го направите. След това се смесват и се подават по 20 ml към всяка стерилна петриева паничка.
Цялата процедура трябва да се извърши в ламинарен поток или около горелката Bunsen.
Оставете да стои, докато не се втвърдят и се държат обърнати в хладилник.
Друг начин за приготвяне на шоколадов агар без използване на кръв
Основната среда се приготвя, както е описано по-горе, получената в търговската мрежа дехидратирана хемоглобина се разтваря и стерилизира в автоклава..
И двата разтвора се оставят да се охлади до 50 ° С, свързват се и се добавя добавката. Смесва се в асептични условия и след това се сервира в стерилни петриеви блюда.
Контрол на качеството
Важно е кръвта да бъде поставена при посочената температура, защото е идеална да лизира червените кръвни клетки и в същото време да поддържа фактор V, който е термочувствителен..
Не трябва да има мехурчета по повърхността на агара. Всяка партида от 100 плаки трябва да бъде инкубирана една или две плаки в печката при 37 ° C за 24 часа, за да се провери стерилността му.
За най-добри резултати трябва да се използва шоколадов агар малко след приготвянето.
В лабораторията трябва да се вземат контролни бактериални щамове, за да се оцени ефикасността на прясно приготвената среда за растежа на основните клинично значими микроорганизми..
препратки
- García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практическа клинична микробиология. Университет на Кадис, 2-ро издание. Служба за публикации на UCA.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Аржентина. Panamericana S.A Редакция.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana S.A..
- Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Възможност за използване на основната културална среда на GC-Biocen Agar в микробиологичната лаборатория. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Предлага се на адрес: scielo.sld.
- Уикипедия. Шоколадов агар. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 17 декември, 2018, 19:54 UTC. Достъпни на: en.wikipedia.org.