Основа за приготвяне и използване на цитратен агар Simmons



на Симънс цитратен агар Той е твърда среда, използвана като биохимичен тест за идентифициране на микроорганизми, особено грам-отрицателни бацили. Оригиналният носител е създаден от Косер през 1923 година.

Цитратната среда на Koser се състои от бульон, съдържащ натриев фосфат, амониев фосфат, монокалиев фосфат, магнезиев сулфат и натриев цитрат..

Както може да се види, единственият източник на въглерод в средата е цитрат, а азот е амониев фосфат, белтъци и въглехидрати, които са пропуснати като източник на тези елементи, те обикновено присъстват в други среди..

Следователно, бактерията, инокулирана в тази среда, може да се размножава само ако е в състояние да приеме цитратния въглерод. Тестът беше положителен, ако имаше мътност в средата, но имаше недостатъка, че може да се получи неспецифична мътност.

Този проблем беше решен от Симънс, добавяйки агар и бромтимолово синьо към оригиналната формула на Косер. Въпреки че принципът е един и същ, той се тълкува по различен начин.

индекс

  • 1 Фондация
    • 1.1 Режим на засяване
    • 1.2 Тълкуване
  • 2 Подготовка
  • 3 Използвайте
  • 4 Заключителни съображения
    • 4.1
    • 4.2 Разсад
    • 4.3 Интензивност на цвета
  • 5 Препратки

фундамент

Някои бактерии имат способността да оцелеят в отсъствието на ферментация или производство на млечна киселина, нуждаещи се от енергия за използване на други субстрати. В този тест единственият източник на въглерод е цитратът.

Бактериите, които са способни да оцелеят при тези условия, метаболизират цитрата бързо чрез алтернатива на традиционния път, като използват цикъла на трикарбоксилната киселина или цитратния ферментационен цикъл..

Катаболизмът на цитрат от бактерии включва ензимен механизъм без намеса на коензим А. Този ензим е известен като лимоназа (цитрат оксалоацетат-лиаза) или цитратен десмолаза. Реакцията изисква наличието на двувалентен катион, който в този случай се доставя от магнезия.

Реакцията генерира оксалоацетат и пируват, които след това водят до образуването на органични киселини в средата на алкално рН, образувано чрез използването на източника на азот. Тези органични киселини се използват като въглероден източник, генериращ карбонати и бикарбонати, което допълнително алкализира средата.

Режим на засяване

Цитратната среда на Simmons трябва да бъде леко инокулирана в рибена опашка с помощта на права линия или игла и инкубирана за 24 часа при 35-37 ° С. В края на времето резултатите се наблюдават.

Засяването се извършва само на повърхността на агара. Не правете пробождане.

интерпретация

Ако средата е с оригинален цвят (зелен) и няма видим растеж, тестът е отрицателен, но ако средата се промени в синьо, това показва наличието на алкални продукти, които се откриват от индикатора за рН. В този случай тестът е положителен.

Това се случва, защото ако бактерията използва въглерода на цитрата, той също е в състояние да вземе азота от амониевия фосфат, с който освобождава амоняк, алкализирайки средата.

От друга страна, ако растежът на бактериите се наблюдава в средата, но няма промяна в цвета, тестът също трябва да се счита за положителен, тъй като ако има растеж, това означава, че бактериите могат да използват цитрат като въглероден източник, въпреки че в момента няма промяна на рН (понякога може да е необходимо).

Ако има съмнение в интерпретацията на крайния цвят, той може да бъде сравнен с тръба с неинокулиран цитрат.

подготовка

Претеглят се 24,2 g дехидратирана среда за един литър вода. Разбъркайте и оставете да престои около 5 минути. Завършете разтварянето на средата чрез нагряване за 1 или 2 минути, като разбърквате често.

Сервирайте 4 ml в епруветки и автоклавирайте при 121 ° С за 15 минути. При напускане на автоклава се накланя с помощта на опора по такъв начин, че агарът да се втвърдява под формата на върха на флейта с малко клинче или дъно и по-скосен.

Крайното рН на цитратната среда е 6.9 (зелено). Тази среда е много чувствителна към рН промяна.

При рН 6 или по-ниска, средата става жълта. Този цвят не се наблюдава при теста с бактерии.

И при рН 7.6 или по-висока, средата се променя до интензивно пруско синьо.

употреба

Симънс цитратен агар се използва за идентифициране на определени микроорганизми, особено бацили, принадлежащи към семейство Enterobacteriaceae и други глюкозо-неферментиращи бацили..

Заключителни съображения

Цитратната среда на Simmons е много деликатен тест, тъй като може да се получат фалшиви положителни резултати, ако се направят някои грешки.

Трябва да се внимава за следното:

инокулант

Не правете много дебел или натоварен бактериален инокулум, тъй като той може да доведе до развитие на медножълт цвят в мястото на засаждане, без да засегне останалата част от средата, но може да доведе до убеждението, че има растеж. Същото не означава положителност на теста.

По същия начин, дебел инокулат може да генерира фалшиво положително, тъй като предварително образуваните органични съединения в клетъчните стени на умиращите бактерии могат да отделят достатъчно въглерод и азот, за да превърнат рН индикатора.

Ето защо, идеалното решение е да се използва иглата вместо платинена дръжка, за да се избегне вземането на излишния материал.

засадени

От друга страна, когато батерията от биохимични тестове е засадена за идентифициране на въпросния микроорганизъм, важно е тестът на цитрата да бъде първият, който да се инокулира, за да се избегне плъзгането на протеини или въглехидрати от друга среда..

При това обстоятелство е възможно да се получи фалшиво положително, тъй като всяко от тези вещества, въведени по погрешка, ще се метаболизира и ще предизвика промяна в рН.

Друг начин да се избегне съпротивлението на веществата е да се изгори добре дръжката и да се приеме нов инокулум между един тест и друг.

Трябва също така да се внимава, когато се докосва колонията, за да се извърши инокулумът, тъй като трябва да се избягва да се изтегли част от агара от културата, от която идват бактериите, поради обяснението по-рано.

В този смисъл Matsen, Sherris и Branson препоръчват разреждане на инокулума във физиологичен разтвор преди инокулиране на цитратния тест, за да се избегне прехвърлянето на други източници на въглерод..

Интензивност на цвета

Трябва да се има предвид, че интензитетът на цвета, който се получава, когато тестът е положителен, може да варира в зависимост от търговската къща.

В допълнение, има микроорганизми, които изпитват положителен резултат в 24 часа, но има и други щамове, които изискват 48 часа или повече, за да произведат промяна в рН.

препратки

  1. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентификация на бактерии от клинично значение. 3-то изд. Редакция Панамерикана. Буенос Айрес Аржентина.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
  4. BD Laboratories BBL Simmons цитратен агар се накланя. 2015. Налично на: bd.com
  5. Laboratories Britania. Симънс цитратен агар. 2015. Налично на: britanialab.com
  6. Диагностични лаборатории на Valtek. Симънс цитратен агар. 2016. Налично на: andinamedica.com.