Основа на Агар CLED, употреба и подготовка



на CLED агар (Цистин-лактоза-електролит-дефицит) е диференциална твърда хранителна среда, използвана за диагностика на инфекции на пикочните пътища. Съставът на хранителната среда е предназначен за добър растеж на пикочните патогени и е идеален за количествено определяне на колони-образуващи единици (CFU).

CLED културалната среда е неселективна, тъй като в нея могат да растат грам-отрицателни и също грам-положителни микроорганизми. Но това не е проблем, тъй като повечето инфекции на пикочните пътища са причинени от един тип микроорганизми.

В случай на полимикробни инфекции могат да се получат 2 или 3 различни бактерии, но това е много рядко и през повечето време е заразено..

Сред грам-отрицателните бактерии, които могат да растат в тази среда, са бацилите, принадлежащи към семейството Enterobacteriaceae и други чревни бактерии, уропатогените, които най-често се изолират в урината, са следните: \ t Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, между другото.

По същия начин, сред грам-положителните бактерии, които могат да растат в тази среда, са Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp и дори могат да отглеждат мая, подобно на комплекса Candida albicans.

Въпреки това, поради химическия състав на средата, той не позволява растежа на някои взискателни генитоуринарни патогени, като например Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella вагиналис, между другото.

индекс

  • 1 Основа на CLED агар
  • 2 Основа на CLED агар (Bevis)
  • 3 Използване
    • 3.1 Засяване на проби от урина
    • 3.2 Тълкуване
    • 3.3 Идентификация
  • 4 Подготовка
  • 5 Препратки

Основа на CLED агар

CLED хранителната среда има като енергиен източник месен екстракт, казеин панкреатичен хидролизат и желатинов хидролизат. Те осигуряват хранителни вещества за развитието на нетретителни бактерии.

Съдържа и цистин, аминокиселина, която позволява растежа на колиформните бактерии, които се различават по малкия си размер.

Също така, лактозата съдържа ферментируема въглехидрат, поради което тази среда е диференциална; да могат да разграничат ферментиращите бактерии от неферментиращата лактоза.

Ферментиращите бактерии превръщат рН на средата чрез производството на киселини, развиващи жълти колонии, докато неферментиращите бактерии не генерират промени в средата, поради което приемат оцветяването на оригиналния агар, зелен цвят..

Ферментационната реакция се разкрива благодарение на присъствието на рН индикатор, който в тази среда е бромтимолов син.

От друга страна, ниската електролитна концентрация на средата инхибира типичния инвазивен растеж на рода Протей, наречен роящ ефект. Това генерира предимство по отношение на други средства, тъй като позволява преброяването на UFCs, включително ако има род Proteus.

Въпреки това, ниската концентрация на електролити инхибира растежа на някои видове от рода Shigella, това е недостатък по отношение на други средства.

Основа на CLED агар (Bevis)

Има вариант или модификация на тази среда, направена от Bevis, която включва оригиналния състав на фуксинова киселина (индикатор Andrade) в оригиналния състав. Той действа заедно с бромтимолово синьо, за да диференцира ферментацията от неферментиращите бактерии.

Разликата между конвенционалната и модифицираната среда е цветът, приет от колониите. В случая на бактериите, ферментиращи лактоза, колониите придобиват червеникаво-оранжев цвят с розово или червено ореол, докато неферментиращите са синкаво сиви..

приложения

CLED агар се използва изключително за сеитба на уринни проби. Използването на тази среда е особено често срещано в европейските лаборатории, докато в Америка е по-малко използвано.

Събирането на пробата трябва да отговаря на определени параметри, за да се получат надеждни резултати, включително:

  • Не приемате антибиотици, преди да вземете пробата.
  • За предпочитане е да се вземе урината от първия час на сутринта, тъй като тя е по-концентрирана, когато не е възможно да се вземат проби чрез инвазивни методи..
  • Старателно измийте гениталиите преди да вземете пробата.
  • Изхвърлете първия поток от уриниране и след това поставете контейнера.
  • Съберете между 25 и 30 ml урина в стерилно маркирани контейнери.
  • Вземете веднага лабораторията, обградена в лед.
  • Тя трябва да бъде преработена преди изтичане на 2 часа или охладена при 4 ° C за максимум 24 часа.

Засяване на урина

Пробата от урината трябва да се разреди 1:50.

За разреждане се поставят 0,5 ml урина на пациента и се разреждат с 24,5 ml стерилен физиологичен разтвор.

Измерва се 0,1 ml от разредената урина и сеитбата на повърхност с drigalski шпатула върху CLED средата. Това е метод за засяване, посочен за преброяване на колонии. Затова се използва в проби от урина, тъй като резултатите трябва да бъдат изразени в CFU / ml.

За количественото определяне на получените колонии се процедира по следния начин: преброяват се колониите на плаката и се размножават с 10 и след това с 50. По този начин се получава количеството CFU / ml урина..

интерпретация

Броене над 100,000 CFU / ml -Индикална инфекция на урината

Броене под 1000 CFU / ml - Няма инфекция

Броене между 1000-10,000 CFU / ml -Doubful, възможно замърсяване, повторно вземане на проби.

идентификация

Колониите, отглеждани на CLED агар, трябва да се получат по Грам и в зависимост от морфотипичните характеристики на микроорганизма се извършва определена субкултура..

Например, ако е грам отрицателен бацил, той ще бъде засят на агар MacConkey, където ферментацията или не на лактозата се потвърждава. Освен това е приложен хранителен агар за извършване на оксидазен тест.

В случай, че грамът покаже грам-положителни коки, той може да бъде субкултивиран в солен манитолов агар и в хранителен агар. В последния се провежда тестът на каталазата. И накрая, ако се наблюдават дрожди, той ще бъде засят на агар Sabouraud.

Много лаборатории премахват използването на CLED среда и предпочитат да използват само кръвен агар, MacConkey и хранителен агар, за да засяват пробите от урина..

подготовка

В флакон с един литър дестилирана вода се разтварят 36,2 g прахообразен агар. След 5 минути почивка, се загрява ресуспендираният агар, като се смесва постоянно до кипене в продължение на 1 минута.

След това се стерилизира при 121 ° С в продължение на 15 минути в автоклава. След като времето е приключило, то се отстранява от автоклава и се оставя да се охлади, докато се достигне температура от 45 ° С. След това се сервират между 15 и 20 ml във всяка стерилна петриева паничка.

Процедурата за сервиране на плочите трябва да се извърши вътре в капака на ламинарен поток или пред горелката Bunsen, за да се избегне замърсяване..

Поставените плаки се оставят да се втвърдят, подреждат се в тапа, обърната и се съхраняват в хладилник (2-8 ° C) до употреба.

Крайното рН на приготвената среда трябва да бъде 7.3 ± 0.2.

препратки

  1. Препоръки за микробиологична диагностика на инфекция на пикочните пътища. Чил. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Достъпни на: scielo.org.
  2. Panchi J. Идентифициране на микробния агент, причиняващ уринарни инфекции при вътрешни пациенти, подложени на катетеризация на пикочния мехур. 2016. Бакалавърска работа за кандидатстване за звание Лицентиат в клиничната лаборатория. Технически университет в Амбато. Еквадор.
  3. Laboratories Britania. Половината CLED. Достъпни на: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Инструкции за употреба, CLED Agar. 2013 Налично на: www.renylab.ind.br.
  5. Cultimed Laboratories Основно ръководство за микробиология. Предлага се на адрес: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Опцията CLED agar в рутинната практика на урината. Проспективна и сравнителна оценка. Диагностична микробиолна инфекция Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Практическа клинична микробиология. Университет на Кадис, 2-ро издание. Служба за публикации на UCA.