Основа, подготовка и употреба на агарния ЕМВ



на EMAR агар е селективна и диференциална твърда хранителна среда, използвана за изолиране на Грам отрицателни бацили, главно от семейство Enterobacteriaceae и други не-изискващи Грам отрицателни бацили. Той е известен също и с акронима ЕАМ, което означава еозин-метиленово синьо.

Тази среда е създадена от Holt-Harris и Teague през 1916 г. Тя съдържа пептон, лактоза, захароза, дикалиев фосфат, агар, еозин, метиленово синьо и вода. Той е много подобен на агар MacConkey, особено ако се използва агар-амид, модифициран с Levine, който не съдържа захароза..

Всъщност всяка лаборатория решава дали работи с едната или другата, тъй като те изпълняват една и съща функция, въпреки че биохимично са различни.

Той дори представя същия недостатък като класическия агар MacConkey по отношение на рояването от рода Proteus. Следователно, за да се избегне това явление, можете да увеличите концентрацията на агар до 5%.

индекс

  • 1 Фондация
    • 1.1 Селективен
    • 1.2 Диференциал
  • 2 Подготовка
  • 3 Използване
  • 4 Контрол на качеството
  • 5 Заключителни съображения
  • 6 Препратки

фундамент

селективен

Агарът EMB е слабо селективен, тъй като съдържа анилинови бои (еозин и метиленово синьо), които действат като инхибитори, предотвратявайки растежа на повечето грам-положителни бактерии и някои изискващи грам-отрицателни бацили..

Обаче, този агар има недостатъка, че някои Грам-положителни бактерии могат да устоят на присъствието на инхибиторните вещества и да растат като малки безцветни точковидни колонии, такива като Enterococcus faecalis и някои стафилокок.

Можете също да отглеждате някои дрожди, като например Комплексът Candida albicans, Тя ще даде много малки розови колонии. От тази дрожди могат да се развият дори хламидоспори, ако пробата е засята с дълбочина.

диференциал

От друга страна, EMB агарът също е диференциална среда, тъй като тези багрила заедно (еозин и метиленово синьо) притежават свойството да образуват утайка при кисело рН, следователно те служат като индикатори за тяхното производство..

Следователно, слабо ферментиращите лактозни или захарозни бактерии произвеждат лилави колонии за 24 до 48 часа. Например родовете Klebsiella, Enterobacter и Serratia.

Тези бактерии, които силно ферментират лактозата, като например Escherichia coli, или захароза, като Yersinia enterocolitica или Proteus penneri, образуват зеленикаво-черна утайка, придаваща метален блясък на тези видове.

Трябва да се отбележи, че ако се използва средата на ЕМВ (без захароза), Yersinia enterocolitica и Proteus penneri те ще произвеждат прозрачни колонии.

Бактериите, които не ферментират лактоза или захароза се подхранват от присъствието на пептони, които осигуряват аминокиселините и азота, необходими за бактериалното развитие, и произвеждат прозрачни колонии. Например, родовете Salmonella и Shigella, между другото.

Също така е важно да се отбележи, че родът Acinetobacter може да представи колонии от лавандулово синьо, въпреки че не е ферментатор на лактоза, нито захароза, но те имат свойството да фиксират метиленово синьо в клетъчната си стена. Това може да се случи и с други оксидативни бактерии.

подготовка

Оригиналната дехидратирана среда е леко бежова.

За приготвяне на тази хранителна среда, 36 грама от дехидратираната среда трябва да се претеглят и суспендират във флакон, съдържащ един литър дестилирана вода..

След като оставите сместа в покой в ​​продължение на 5 минути, приведете фиола в източник на топлина, смесете енергично и постоянно, докато кипи и напълно се разтвори..

След това, разтворената културална среда трябва да бъде стерилизирана с автоклав при 121 ° С за 15 минути.

В края на времето, той се отстранява от автоклава и се оставя за кратко. След това се сервира дори горещо (45 - 50 ° С) между 15 до 20 ml агар във всяка стерилна петриева паничка. Средата трябва да бъде синя лакмус.

След сервиране, плаките се оставят леко разкрити докато агарът се охлади малко. След това те се покриват и се оставят да се втвърдят напълно. По-късно те се подреждат в държател на плаката и се съхраняват в хладилник (8 ° C), докато се използват.

Тази процедура за предпочитане се извършва в ламинарен поток или пред горелката на Bunsen, за да се избегне замърсяване.

Важно е да се има предвид, че всяка търговска къща ще посочи количеството, което ще се претегли, за да се приготви културалната среда.

Крайното рН на средата трябва да бъде 7.2 ± 0.2

приложения

Тази среда се използва за засяване на урина и фекалии или всякакъв вид клинични проби, особено ако се подозира наличието на не-изискващи Грам-отрицателни бацили, като бацили, принадлежащи към семейството Enterobacteriaceae, което расте много добре в тази среда.

Ентеропатогенните бактерии от родовете Shigella и Salmonella се отличават със своите безцветни или леко кехлибарени колонии..

Други неферментиращи лактозни бацили също растат, като например Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter и др..

Също така, тази среда е много полезна при микробиологичния анализ на храната и водата, тъй като е идеална за пълната потвърждаваща фаза на определянето на колиформи, т.е. за потвърждаване на наличието на Е. coli от мътни бульони от ЕК, от най-вероятната бройна техника (NMP).

Контрол на качеството

За да се провери дали новата култивирана хранителна среда работи добре, контролните щамове могат да бъдат засадени, за да се наблюдават характеристиките на колониите и да се провери дали те дават както се очаква.

За това, АТСС щамове или добре идентифицирани щамове на Е. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa и някои грам-положителни бактерии, като S. aureus.

Очаква се това Е. coli Генерират добре развити синьо-черни колонии със зелен метален блясък. Докато, Enterobacter aerogenes и Klebsiella sp те трябва да дават добре развита мукозна колония синкаво-черна.

От своя страна, салмонела Typhimurium и Shigella flexneri, те трябва да развиват големи колонии, безцветни или с леко кехлибарен цвят.

Накрая жанра Pseudomonas aeruginosa расте като безцветни колонии с неправилен размер, докато грам-положителните бактерии трябва да бъдат напълно инхибирани или да растат пестеливо с много малки колонии.

Заключителни съображения

Понякога стерилизацията води до намаляване на метиленовото синьо, като се наблюдава оранжева среда. За да се окисли метиленовото синьо и да се възстанови пурпурният цвят, той трябва да се смеси внимателно, докато цветът се възстанови.

Също така, след стерилизацията може да се утаи багрилото, така че трябва да се смеси добре преди сервиране на петриевите блюда.

препратки

  1. Камачо А, Джайлс М, Ортегон А, Палао М, Серано Б и Веласкес О. 2009. Техники за микробиологичен анализ на храни. 2nd ed. Химически факултет, UNAM. Мексико.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Характеристика и разпределение на щамовете на Escherichia coli Потенциално патогенни изолати от пилешки бройлери от птицеферми в Перу. Rev. ветеринар. Перу 2012 23 (2): 209-219. Достъпни на: scielo.org.
  3. Laboratories Conda S.A. Еозин агар и метиленово синьо. 2010. Налично на: condalab.com
  4. Laboratories Britania. Levine E.M.B (с еозин и метиленово синьо) 2011. Достъпно на: britanialab.com
  5. BD Laboratories Агар (Еозин метиленов син агар), модифициран. 2013. Налично на: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Аржентина. Panamericana S.A Редакция