Основа, подготовка и употреба на Agar Endo

на Ендо агар или среда Endo е твърда, диференциална културална среда с определена степен на селективност. Първоначалната формула е създадена от Endo през 1904 г., за да се разграничат бактериите за ферментация на лактоза от неферментиращи бактерии. В началото е предназначена за изолация на Salmonella typhi, но по-късно целта на средата се обърна към търсенето на колиформи.

Принципът на ендо агар е запазен, но неговата формулировка е претърпяла безброй промени през годините. Понастоящем средата се състои от животински тъкани, разградени от пептиди, лактоза, дикалиев хидроген фосфат, натриев сулфит, основен фуксин и агар..

Основната употреба на средата е свързана с изолирането и диференцирането на Грам отрицателни бацили, принадлежащи към семейството Enterobacteriaceae и към други близки семейства..

Дълго време тя се използва за откриване на колиформни форми във вода, млечни и хранителни проби, но в днешно време използването на тази среда е изместено от други подобни функции. Някои микробиологични лаборатории обаче използват този агар за изолиране на Enterobacteriaceae от проби с клиничен произход..

индекс

• 1 Фондация
• 2 Подготовка
  • 2.1 Ендо агар
  • 2.2 Вариант на агар m-Endo
• 3 Използвайте
• 4 Контрол на качеството
• 5 Ограничения
• 6 Препратки

фундамент

Endo agar съдържа пептони, които служат като източник на аминокиселини, азот, въглерод и енергия, необходими за растежа на нетретителни микроорганизми..

От друга страна, леко селективният характер на агара се осигурява от добавянето на натриев сулфит и основен фуксин; двата компонента частично или напълно инхибират развитието на повечето грам-положителни бактерии.

Диференциалният характер се дава от наличието на ферментирал въглехидрат, който в този случай е лактоза и основен фуксин, който също служи като индикатор за рН.

Грам-отрицателни бактерии, които растат на този агар и могат да ферментират лактоза, ще образуват силни розови колонии; като патогномоничен Escherichia coli образуването на тъмно червени колонии със зелен метален блясък, преливащи се в преливащи се цветове. Това се дължи на високото производство на киселини от ферментацията на въглехидрати.

Трябва да се отбележи, че средата, която е около колониите, също се превръща в силен розов цвят. Докато неферментиращите грам-отрицателни бацили от лактоза образуват бледо розови колонии, подобни на средни или безцветни.

Дикалиев хидроген фосфат балансира рН на средата и агарът е компонентът, който осигурява твърдата консистенция.

подготовка

Endo Agar

Претеглят се 41,5 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Сместа се загрява, като се разбърква често до пълно разтваряне на средата. Стерилизира се в автоклав при 121 ° С, при налягане 15 lb, в продължение на 15 минути.

Когато се изважда от автоклава, оставя се да се охлади до температура приблизително 45-50 ° С, разклаща се сместа, за да се хомогенизира преди сервиране. Изсипете 20 мл в стерилни петриеви блюда.

Оставете плочите да се втвърдят, да се обърнат и да се съхраняват в кутия или да се обвият с тъмна хартия, преди да се съхранят в хладилник. Много е важно да се предпази подготвената среда от директна светлина. Препоръчителната практика е да се подготви точната сума, която ще бъде необходима.

Ако се съхраняват в хладилник, плочките трябва да бъдат темперирани преди употреба.

РН на средата трябва да бъде между 7.2 до 7.6 и цветът на приготвената среда е бледо розов..

Вариант агар m-Endo

Има и друга версия на ендо агар (m-Endo), която следва формулата на McCarthy, Delaney и Grasso, която съдържа повече съединения и варира в начина на приготвяне..

Този вариант съдържа: лактоза, триптоза, ензимно разграждане на казеин, ензимно разграждане на животинска тъкан, натриев хлорид, двуосновен калиев фосфат, натриев сулфит, дрождев екстракт, калиев фосфат, основен фуксин, натриев деоксихолат, лаурил сулфат натрий и агар.

В този случай претегляме 51 g от дехидратираната среда и го суспендираме в 1 литър дестилирана вода, съдържаща 20 ml етанол..

Загрява се леко докато се разбърква, докато средата се разтвори напълно. Не прегрявайте и не стерилизирайте в автоклав. След като сместа е хомогенна, сервирайте в стерилни петриеви блюда и оставете да се втвърди.

употреба

В някои страни той все още се използва за преброяване на общите и фекални колиформни форми във вода и проби от храни, особено при наличието на Escherichia coli като основен индикатор за фекално замърсяване.

M-Endo agar се препоръчва от Американската асоциация за обществено здраве (APHA) за мониторинг и контрол на програмите за дезинфекция и пречистване на отпадъчни води, както и за оценка на качеството на питейната вода..

Най-използваният метод е мембранна филтрация, след обогатяване на пробата с лаурилсулфатен бульон за 2 до 4 часа.

Той може да се използва и като заместител на агар EMB в микробиологичния анализ на храната и водата чрез най-вероятната техника за брой (NMP), по-специално в пълната потвърждаваща фаза, за да се потвърди наличието на Е. coli от мътни бульони ЕО.

Контрол на качеството

За да се оцени качеството на получената партида Endo агар, се засяват известни или сертифицирани контролни щамове.

Сред щамовете, които могат да бъдат използвани за тази цел са: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 и Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Щамовете се засяват чрез изчерпване и се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 часа при аеробиоза.

Очакваните резултати са:

• за Escherichia coli: колонии силни червени, с метален блясък.
• за E. cloacae и K. pneumoniae колониите трябва да са розови мукоиди.
• В случая на S. typhimurium, S. flexneri и P. mirabilis колониите обикновено са бледо розови или безцветни.
• накрая, E. faecalis очаква се тя да бъде частично инхибирана, поради което растежът му трябва да бъде беден с много малки колонии със силно розово.

ограничения

-Средата Endo има ниска селективна сила, следователно е възможно някои грамположителни микроорганизми като Staphylococcus, Enterococcus и дори дрожди да растат..

-Други бацили, които не принадлежат към семейство Enterobacteriaceae, могат да се развият в тази среда, като например Pseudomonas sp и Aeromonas sp. Характеристиките на тези щамове са безцветни нередовни колонии.

-Подготвената среда е много чувствителна към светлина, поради което продължителното излагане на това влошава индикаторната система, като необратимо уврежда средата.

-Компонентите на средата се считат за канцерогенни, затова трябва да се избягва директен контакт.

-Дехидратираната среда е много хигроскопична и трябва да се съхранява в оригиналната опаковка при стайна температура, плътно затворена и в суха среда..

препратки

1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Налично на: bd.com
2. Neogen Laboratories М ендо агар. Предлага се на адрес: foodsafety.neogen.com
3. - Агар Ендо. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 7 сеп 2017, 08:27 UTC. 28 февруари 2019, 22:55. Предлага се в: en.wikipedia.
4. Лаборатория на MercK. Ендо агар 2019. Достъпен на: merckmillipore.com
5. Технически лист на лабораториите. M -Endo Agar LES. 2015. Налично на: liofilchem.net