Основа, подготовка и употреба на агар Хектоен



на Хектоен агар или ентеричен хектоен агар е твърда, селективна и диференциална културална среда. Тя е създадена в Института Хектоен от Кинг и Мецгер за изолиране на ентеропатогенни бактерии от родовете Shigella и Salmonella..

Средата е съставена от протеозен пептон, дрождев екстракт, жлъчни соли, лактоза, захароза, салицин, натриев тиосулфат, натриев хлорид, железен цитрат, амониев цитрат, бромтимолов син, кисел фуксин и агар. Тази формулировка позволява да се разграничат родовете Shigella и Salmonella от останалите бактерии, способни да растат в тази среда..

Въпреки че има други средства със същата функция като Hektoen агар, това представлява по-голямо предимство в сравнение с други средства, особено когато искате да възстановите Shigella видове..

Видовете от двата рода предизвикват тежки стомашно-чревни проблеми при хора поради консумацията на заразена храна; следователно предаването е фекално - орално. Ето защо използването на хектоен агар се посочва главно в микробиологичния анализ на проби от изпражнения и храни..

индекс

  • 1 Фондация
  • 2 Подготовка
  • 3 Използвайте
  • 4 Контрол на качеството
  • 5 Ограничения
  • 6 Препратки

фундамент

Хектоен агар съдържа пептони и дрождев екстракт като източник на хранителни вещества, осигуряващи основните елементи за микробното развитие.

Въпреки това, той има и жлъчни соли, които действат чрез инхибиране на растежа на някои бактерии, особено грам-положителни и някои грам отрицателни. Поради тази причина тя се счита за селективна среда.

От друга страна, Hektoen агар е диференциална среда. Това свойство се дължи на присъствието на ферментиращи въглехидрати като лактоза, захарора и салицин, заедно с рН индикаторната система, представена от бромтимолово синьо и кисел фуксин..

Всички бактерии, способни да растат в тази среда, които не принадлежат към рода Salmonella и Shigella, ще развият сьомга или оранжеви колонии с изключение на рода Proteus. Това се дължи на ферментацията на един или няколко присъстващи въглехидрати, които подкисляват средата, което води до включване на индикатора за рН..

От своя страна родовете Shigella и Salmonella не могат да ферментират към никой от наличните въглехидрати, като използват само пептоните като енергиен източник, който алкализира околната среда и следователно колониите му са синьозелени.

Също така в тази среда могат да се разграничат бактерии, способни да образуват сероводород (безцветен газ). Натриевият тиосулфат действа като източник на сяра, докато железният цитрат е разкриващият агент. И двете съединения правят възможно образуването на черна утайка от железен сулфид, което доказва реакцията.

Черната утайка в центъра на колонията с прозрачен ореол около нея придава вид на рибено око. Тази характеристика предполага наличието на рода Salmonella.

Накрая, натриевият хлорид поддържа осмотичния баланс и агарът дава твърдата консистенция на средата.

подготовка

Претеглят се 76 g от дехидратираната среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Сместа се разклаща енергично и след това се оставя да престои 10 до 15 минути. Тя може да се загрява и вари, като се въртят до пълното му разтваряне. Тази среда не е автоклавирана.

Когато средата достигне температура от приблизително 45 ° С, обем от 20 ml се излива директно в стерилни петриеви панички..

Агарът се оставя да се втвърди. По това време те са готови за употреба. Препоръчително е да ги използвате веднага. Ако не са възможни, те трябва да се съхраняват в хладилник, докато се използват.

Тарелките трябва да бъдат отстранени рано от хладилника, преди да бъдат засадени, за да се вземе стайна температура.

РН на средата трябва да бъде 7.5 ± 0.2. Цветът на дехидратираната среда е пурпурен и приготвен е кафяво зелен.

употреба

Препоръчва се използването на хектоен агар за търсене на бактерии от рода Shigella и Salmonella в проби от изпражнения и храни..

Възможността за изолиране на тези бактерии се увеличава значително, ако пробата е предварително обогатена със специални бульони, като бульон от селенит, бульон от селенит цистин, тетратионатен бульон и др..

Инокулумът трябва да бъде силен и засяването да се извършва чрез набиване. Плаките се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 до 48 часа при аеробиоза.

Инкубацията се препоръчва за 48 часа, тъй като характеристиките на колониите са по-ясни за тяхното интерпретиране и диференциация в този момент.

Контрол на качеството

За извършване на качествен контрол върху тази среда се използват сертифицирани бактериални щамове, като: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 и Shigella sonnei ATCC 25931.

Очакваните резултати са следните: Salmonella typhimurium и  Salmonella enteritidis те трябва да развиват зелено-сини колонии със или без черен център. Докато Shigella видове ще растат като синьо-зелени колонии.

Можете също да включите щамове на Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 и Staphylococcus aureus ATCC 25923.

В тези случаи наблюдаваните характеристики са следните: Е. coli и K. pneumoniae В тази среда те ще развият колонии от сьомга до оранжево, като около тях има утайка от същия цвят. Междувременно Proteus ще развие синьо-зелени колонии с или без черен център.

докато S. aureus и  E. faecalis понякога трябва да се инхибира E. faecalis успява да расте като жълти колонии, много малки.

От друга страна, тъй като тази среда не е стерилизирана в автоклав, е важно да се оцени стерилността на средата. Затова всяка подготвена партида трябва да се инкубира една до две плаки без инокулиране при 37 ° С за 24 часа при аеробиоза..

Очевидно се очаква, че няма никакъв растеж върху плочата.

ограничения

-Протеви видове могат да се развиват в тази среда и характеристиките на техните колонии могат да бъдат объркани със Salmonella или Shigella видове. Поради тази причина всяка подозрителна колония трябва да бъде потвърдена с биохимични тестове.

-Необходимо е да се придружава използването на тази среда с други по-слабо селективни агари, защото ако се търси микроорганизъм в ниски концентрации, той може да не се развие в тази среда..

-Не прегрявайте по време на подготовката, тъй като прекомерната топлина променя състава на средата.

-Необичайно ферментиращите лактоза колонии на Salmonella могат да изглеждат незабелязани.

препратки

  1. Уикипедия. Хектоен ентеричен агар. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 13 март, 2019, 23:38 UTC. Достъпни на: .wikipedia.org / Достъп 16 март, 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen ентеричен агар (HE Agar). 2013. Налично на: bd.com
  3. Laboratories Britania. Хектоен ентеричен агар. 2015. Налично на: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Агар Хектоен агар. Предлага се на адрес: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen ентеричен агар. Второ издание. Предлага се в: bd.com/europe