Агар LIA (лизин желязо) основа, подготовка и употреба



на LIA агар (Лизин Желязо) е биохимичен тест, използван за идентифициране на бактерии от семейството Enterobacteriaceae. Тази среда е създадена от Едуардс и Файф, базирана на формулата на Фалков.

Първоначално този тест беше бульон, съдържащ пептони, дрождев екстракт, глюкоза, L-лизин, бромокрезолово пурпурно и дестилирана вода. Edwards и Fife добавят агар-агар, железен амониев цитрат и натриев тиосулфат.

Тестът основно се състои от демонстриране на присъствието на ензима лизин декарбоксилаза, способен да реагира с карбоксилната група на аминокиселината L-лизин. Деаминирането на аминокиселината може да се получи и поради наличието на ензима лизин деаминаза.

Освен това, съставът на средата позволява да се демонстрира способността на някои бактериални родове да произвеждат сероводород. Накрая, възможно е също така да се наблюдава генерирането на газ в средата.

индекс

  • 1 Фондация
    • 1.1 Пептони и дрождев екстракт
    • 1.2 Глюкоза
    • 1.3 L-лизин
    • 1.4 Индикатор на рН (бромокрезолово лилаво)
    • 1.5 Амониев железен цитрат и натриев тиосулфат
  • 2 Тълкуване на теста
    • 2.1 Декарбоксилиране на лизин
    • 2.2 Дезаминиране на лизин
    • 2.3 Производство на сероводород (H2S)
  • 3 Записване на резултатите
  • 4 Подготовка
  • 5 Използване
  • 6 Препратки

фундамент

Пептони и екстракт от дрожди

Подобно на повечето хранителни среди, железният лизин агар съдържа компоненти, които осигуряват източника на хранителни вещества, необходими за бактериалния растеж. Тези компоненти са представени от пептони и дрождев екстракт.

гликоза

Също така, този агар съдържа ферментирала въглехидратна глюкоза. Известно е, че всички бактерии от семейството Enterobacteriaceae ферментират глюкоза.

Тази стъпка е от решаващо значение, тъй като ще бъде отговорна за подкиселяването на средата, което е съществено условие ензимът лизин декарбоксилаза, ако е налице, да действа върху неговия субстрат..

В някои бактериални родове може да се наблюдава производството на газ, дължащо се на ферментацията на глюкоза.

Газът се доказва, когато има изместване на агара в тръбата, оставяйки празно пространство на дъното на тръбата или чрез раздробяване на средата в две или повече части..

L-лизин

След като лизинът се декарбоксилира, се образуват диамин (кадаверин) и въглероден диоксид.

Декарбоксилирането се осъществява в присъствието на коензим пиридоксал фосфат. Тази реакция е необратима.

PH индикатор (бромокрезолово лилаво)

Всички промени на рН, настъпили в средата чрез различните реакции, се откриват чрез индикатора за пурпурно рН на бромокрезола.

В този смисъл, когато има подкиселяване, средата става жълта, а когато има алкализация, средата се връща към първоначалния пурпурен или лилав цвят.

Когато се проявява дезаминиране на лизина в присъствието на ензима лизин деаминаза, червеникави цветни форми на повърхността, типични за родовете Proteus, Providencia и някои видове Morganella.

Това се дължи на факта, че по време на процеса на деаминиране се образува алфа-кетокарбонова киселина, която реагира с амониев цитрат в присъствието на кислород, което причинява гореспоменатия цвят..

Амониев железен цитрат и натриев тиосулфат

От друга страна, бактериите, произвеждащи сероводород, ще бъдат доказани от присъствието на натриев тиосулфат (източник на сяра) и фери амониев цитрат, който е проявител на Н2S.

Бактериите, притежаващи ензим тиосулфат редуктаза, имат способността да действат чрез намаляване на наличния натриев тиосулфат, образувайки сулфит и сероводород (Н).2S).

Последният е безцветен газ, но когато реагира с желязната сол, образува метален железен сулфид, който е неразтворимо съединение (видима черна утайка)..

Въпреки това, капацитетът на H образуване2S с тази среда не е много надеждна, защото някои отрицателни лизиндекарбоксилазни бактерии са способни да произвеждат Н2S няма да образува черната утайка, защото киселинността на средата се намесва. Затова се препоръчва да се провери с други средства, които съдържат желязо.

Тълкуване на теста

Декарбоксилиране на лизин

Тръбите трябва да се четат след 24 часа инкубация, в противен случай съществува риск от неправилно тълкуване на реакцията, като се докладват фалшиви отрицателни резултати..

Трябва да се помни, че първата реакция, която ще настъпи, ще бъде ферментацията на глюкозата, затова всички тръби след 10 до 12 часа ще пожълтяват жълто..

Ако в края на инкубационния период (24 часа) се наблюдава жълт фон с пурпурна или пурпурна повърхност, реакцията е отрицателна. Пурпурният цвят на повърхността съответства на алкализирането на средата чрез използването на пептони.

Положителна реакция е тази, при която дъното и повърхността на тръбата са напълно пурпурни, тоест се връща към оригиналния цвят.

Следователно, кой определя позитивността на теста, е основата или дъното на средата. Ако имате съмнения относно цвета, можете да го сравните с неинокулирана LIA тръба.

Дезаминиране на лизин

Епруветка, която доказва дезаминирането на лизин, ще има червеникаво-кафява повърхност и жълт фон (киселина), или цялата червеникаво-кафява тръба..

Тази реакция се интерпретира като отрицателна за декарбоксилирането на лизин, но положителна за деаминиране на лизин.

Тази реакция се дефинира и интерпретира в откос.

Производство на сероводород (Н2S)

Положителна реакция се наблюдава чрез появата на черна утайка на цялата или част от средата. Обикновено между наклонената граница и основата.

Ако утайката се появи в тръбата, тя няма да покаже другите реакции, които се появяват в средата.

Записване на резултатите

При интерпретиране на теста резултатите се записват както следва:

Първо прочетете фаската, после дъното или Тако, след това производството на Н2S, и накрая производство на газ.

Пример: K / A + (-). Това означава:

  • K: Алкална рамка (лилаво)
  • А: Киселинен (жълт) фон, т.е. отрицателна реакция на декарбоксилиране и отрицателно деаминиране.
  • +Производство на сероводород
  • (-): Без газ.

подготовка

Претеглят се 35 g дехидратиран железен лизанов агар и се разтварят в един литър дестилирана вода.

Загрява се, докато агарът се разтвори напълно, така че да се кипва за 1 минута. Разпределете 4 ml от средата в 13/100 епруветки с памучен капак.

Стерилизира се в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути. Извадете от автоклава и оставете да се отпусне по наклонен начин, така че да има дълбока основа и къс фаска.

Да се ​​съхранява в хладилник 2-8 ° С. Оставете да се разбърка преди засаждането на бактериалния щам.

Цветът на дехидратираната среда е бежова, а средата - червеникаво-лилав цвят.

Крайното рН на приготвената среда е 6.7 ± 0.2.

Средата става жълта с рН, равна на или по-малка от 5.2, и пурпурна при рН 6.5 нагоре.

приложения

Този тест, заедно с други биохимични тестове, се използва за идентифициране на бацили от семейството Enterobacteriaceae..

Средата се засява с права линия или игла, един или два удара се правят на дъното на тръбата, след което повърхността на средата се зигзагира.

Инкубира се в продължение на 24 часа при 35-37 ° С при аеробиоза. При необходимост се оставя да се инкубира още 24 часа.

По-специално е полезно да се разграничат отрицателните видове лактоза от Citrobacter Salmonellas sp.

препратки

  1. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентификация на бактерии от клинично значение. 3-то изд. Редакция Панамерикана. Буенос Айрес Аржентина.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
  4. Laboratories Britania. Лизин железен агар. 2015. Налично на: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL лизин железен агар се накланя. 2007. Налично на: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Налично на: andinamedica.com