Дял:
Основа на папа декстроза, подготовка и употреба
на папа декстрозен агар това е твърда, неселективна хранителна хранителна среда. Той може да отглежда бактериални и гъбични видове, но употребата му е показана специално за изолиране на филаментни гъби и дрожди. Той е известен също като PDA среда от английския израз "картофен декстрозен агар".
Той е особено полезен за изолирането на фитопатогенни гъби, т.е. тези, които засягат растенията. За да се отгледат пробите от заразени растения, могат да се използват други среди като Sabouraud agar или malta agar, но за рутинна употреба се предпочита картофен декстрозен агар поради по-голяма спорообразуване..
Използва се и за преброяване на гъбични колонии в проби от козметика, фармацевтични продукти и някои млечни продукти. По същия начин е подходящо да се отглеждат проби от кожни отломки в търсене на дерматофити, които растат много добре в тази среда, развивайки техните характерни пигменти..
Средството за картофена декстроза е много проста и лесна за приготвяне в лабораторията. Той съдържа, както подсказва името, инфузия на картофи, декстроза и агар-агар. Допълнително могат да се добавят инхибиторни вещества, за да се предотврати бактериалния растеж и да се увеличи селективността за гъбични видове.
индекс
- 1 Фондация
- 2 Подготовка
- 2.1 - Домашно (нетърговско) приготвяне на тапа декстрозен агар
- 2.2 - Търговско получаване на тапа декстрозен агар
- 3 Използване
- 3.1 Процес на засаждане на растителни проби върху картофен декстрозен агар
- 3.2 Процес за засаждане на проби от кожа, коса или люспи за нокти на тапа декстрозен агар
- 3.3 Процедура за идентификация
- 3.4 Брой колонии
- 3.5 Поддържане на гъбични щамове
- 4 Контрол на качеството
- 5 Препратки
фундамент
Папа декстрозен агар е хранителна среда, която осигурява необходимите хранителни елементи за развитието на филаментни гъби и дрожди.
Комбинацията от картофено вливане с глюкоза осигурява идеалния източник на енергия за задоволителен растеж на гъбичките. Докато агарът е този, който осигурява консистенция на околната среда.
Средата сама по себе си не инхибира растежа на бактериите, така че е неселективна среда. За да стане селективно, трябва да се добавят инхибиторни вещества като винена киселина или антибиотици.
подготовка
-Домашен (нетърговски) препарат на картофен декстрозен агар
Петри
Той се изготвя по следния начин:
Първо, картофите се измиват много добре, отстранявайки замърсяванията, които имат. Те се нарязват на тънки резени с всичко и черупки. 200 g картофи се претеглят и се оставят да ври в литър дестилирана вода в продължение на половин час.
След време се филтрира или прецежда целия препарат през марля.
Получената течност се допълва с дестилирана вода, докато достигне един литър. Към инфузията се добавят 20 g агар-агар и 20 g декстроза, разбъркват се добре и се автоклавират при 121 ° С, при налягане 15 паунда в продължение на 15 минути..
Оставя се да се охлади до 50 ° С и се сервира в стерилни петриеви блюда. Готовите плочи се съхраняват в хладилник.
клинове
Можете също така да приготвите пасти декстрозни агар клин.
В този случай, преди стерилизиране в автоклава, 12 до 15 ml от средата се поставят в епруветки, след което се автоклавират и при напускане те лежат на специални опори до втвърдяване. Запазете в хладилник.
Средата остава при рН 5.6 ± 0.2, но някои лаборатории добавят 10% винена киселина, за да понижат рН до 3.1 ± 0.1, за да инхибират растежа на бактериите..
В същия смисъл, други лаборатории предпочитат да добавят антибиотици, за да го направят селективен за отглеждане на гъби и да се предотврати бактериалното развитие..
-Търговско получаване на картофен декстрозен агар
Претеглят се 39 g от наличната в търговската мрежа дехидратирана среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Оставете в покой за 5 минути.
Сместа се нагрява чрез разбъркване до пълното му разтваряне. След това се стерилизира в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути.
Може да се приготвят плочи или клинове. Продължете както е описано по-горе.
РН остава при 5.6 ± 0.2. Ако се желае рН 3,1, трябва да се добавят 14 ml 20% стерилна винена киселина преди сервиране на плочите..
Цветът на неподготвената среда е бежово и приготвен е светло кехлибарен с леко мътен или опалесцентен вид.
приложения
Процес за засаждане на растителни проби в картофен декстрозен агар
-За листа с петна
Листата се нарязват на парчета.
В 50-градусова чаша с 50% алкохол, поставете парчетата от листата (оцветени и здрави), за да дезинфекцирате повърхността за 20 до 30 секунди. Издърпайте алкохола и добавете 20% натриев хипохлорит за 40 до 50 секунди, ако са тънки листа и увеличите времето до 80 секунди, ако е кора и трупчета.
Издърпайте натриевия хипохлорит и вземете със стерилен клип дезинфекцираните парчета и ги поставете върху повърхността на средата (максимум 10 броя). Поставя се датата и се инкубира от 20 до 30 ° С.
-За плодове и грудки
Ако плодът е месест, отворете плода, засегнат от гъбичките и вземете парченца със стерилен скалпел, както болната част, така и здравата част и я поставете на повърхността на агара..
Ако плодовете са цитрусови, като например лимон или портокал, трябва да отворите и засадите семената си.
Когато повърхността на плода е засегната и се наблюдават спори, най-добре е да се използва настърган метод върху плочата; това се състои в докосване на спорите с шпатула под формата на "L" стерилизирана и охладена, след което се извършва зигзагообразно засяване 2 до 3 пъти на агар.
-За зърна
Те се дезинфекцират, както е описано в листата и след това се поставят върху агара.
-За клони и стъбла
Извършва се изстъргване на кората и след това се вземат парчета здрава и болна част и се засяват директно върху агара..
Засятите плочи се инкубират в аеробиоза при 20-30 ° С в продължение на 72 часа.
Процес за засаждане на проби от кожа, коса или люспи за нокти на тапа декстрозен агар
Пробата трябва да бъде взета с помощта на острие на скалпел № 11, за да се отреже засегнатата коса, кожните люспи или ноктите в търсене на дерматофити. Преди да вземете пробата, площта трябва да се дезинфекцира със 70% алкохол.
-Проба от кожата
При люспестите лезии ръбът на лезията трябва да се остъргва, тъй като е по-вероятно да се открие гъбичката.
При ексудативни лезии пробата се взема със сух или влажен тампон. Посейте веднага върху картофен декстрозен агар или Sabouraud агар. Избягвайте транспортни средства.
Друг метод за вземане на проби е чрез квадратната техника на Мариат и Адан Кампос. В този случай засегнатата област се втрива 5 пъти с парче стерилна вълна за по-нататъшно култивиране.
Пробата може да бъде поставена директно в културалната среда.
-Проба за коса
В зависимост от патологията, засегнатата част може да бъде отрязана или разкъсана от корените. Пробата се поставя в културалната среда.
-Образец на нокти
Можете да изстържете или изрежете определена част от засегнатия нокът. Това ще зависи от вида на нараняването.
Пробата се нарязва на 1 mm парчета преди засяването, за да се увеличи вероятността от контакт на гъбичката с културалната среда..
Процедура за идентифициране
Получените в плаката колонии се изолират в епруветки, съдържащи картофен декстрозен агар, за да се извърши макроскопско изследване на колониите (външен вид, цвят, консистенция, степен на развитие)..
Микроскопското изследване (наблюдение на структури и техните образувания) може да се извърши чрез микрокултури или директно наблюдение под микроскоп между ламина и ламела..
Брой колонии
Тази среда може да се използва и за определяне на натоварването на гъби и дрожди, присъстващи в растителни проби, храна, козметика или лекарства. За тази цел се използва папа декстрозен агар, допълнен с антибиотици, като: (хлорамфеникол, хлоротетрациклин или и двете).
Изсипете 1 ml от пробата - за предпочитане разредена - в стерилна и празна петриева паничка, след това разтопете тапата на картофения декстрозен агар и оставете да се охлади до 45 ° С. Изсипва се върху чашката на Петри и се завърта, докато се хомогенизира. Оставете го в покой докато не се втвърди.
Инкубирайте при аеробиоза при 20-25 ° C (плесени) или при 30-32 ° C (дрожди) в продължение на 5 до 7 дни или повече, в зависимост от вида на търсената гъба и вида на пробата. Две плаки могат да се използват за инкубиране в двата температурни диапазона.
Поддържане на гъбични щамове
Папа декстрозен агар може да се използва за поддържане на жизнеспособни гъбични щамове в продължение на няколко години.
За да се постигне това, гъбичката се отглежда в клиновете от тапа декстрозен агар и след като гъбата се отглежда, тя се покрива с минерално масло. Маслото трябва да се стерилизира в автоклав в продължение на 45 минути и да има приблизителен вискозитет от 300 до 330 Saybolt. Маслото трябва да превишава конусовидния връх с 1 до 2 cm.
Контрол на качеството
От всяка приготвена партида трябва да се вземат една или две плаки и да се инкубират при 25 ° С в продължение на 48 часа или при 20 ° С в продължение на 96 часа. Добър контрол на стерилитета е този, при който няма развитие на колонии.
Известни или сертифицирани контролни щамове като:
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Във всички случаи се очаква добър растеж.
препратки
- Laboratories Britania. Папа глюкозадо агар. 2015. Налично на: britanialab.com
- Neogen Laboratories Картофен декстрозен агар. Предлага се на адрес: foodsafety.neogen.com
- Лаборатория за инсумолаб Картофен декстрозен агар. Предлага се на адрес: insumolab.cl
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
- Касас-Ринкон Г. Обща микология. 1994. Второ издание на Universidad Central de Venezuela, Библиотечни издания. Венецуела, Каракас.
- Aceituno M. Оценка на микробиологичното качество в сенки за очи, компактен тип прах на национална производствена лаборатория, съгласно Референтния метод за фармакопея Usp 2005. Теза, за да се квалифицира за званието Фармацевтичен химик. Университет Сан Карлос де Гватемала.
- Cuétara M. Обработка на повърхностни проби. Списание Iberoamerican Mycology. 2007; стр. 1-12