Основа, подготовка и употреба на агар Сабуро

на Sabouraud агар, Известен също като Sabouraud декстрозен агар, той е твърда хранителна среда, особено обогатена за изолиране и развитие на гъбички, като дрожди, плесени и дерматофити..

Следователно, това средство не може да липсва в микробиологична лаборатория за изследване на наличието на патогенни или опортюнистични гъби, както от клинични, така и от неклинични проби. По същия начин, той е идеален и за растежа на нишковидни бактерии като Streptomyces и Nocardia. Използването му е много широко, може да се използва в човешката, животинската, растителната и индустриалната микология.

Тази среда е създадена през 1896 г. от известния дерматолог Раймонд Сабуро, който става световноизвестен специалист по заболявания на скалпа, главно причинен от дерматофити..

Създаването му беше толкова важно, че се използва оттогава и продължава и днес, макар и с някои изменения.

Въпреки че е специален за гъбичките, в тази среда бактериите могат да растат, затова за проби със смесена флора се изисква включване на антибиотици в тяхното приготвяне и по този начин да се потиска растежа на бактериалната флора, която може да присъства..

Изборът на антибиотик трябва да се прави внимателно и като се вземе предвид видът на гъбичките, които искате да възстановите, тъй като някои от тях се инхибират в присъствието на определени вещества..

индекс

• 1 Фондация
  • Най-често се използват комбинации от декстрозен агар Sabouraud с антибиотици
• 2 Подготовка
  • 2.1 Декстроза Sabouraud агар 
  • 2.2 Сабуро декстрозен агар (модификация на еммонс)
  • 2.3 Sabouraud декстрозен агар (модификация на Emmons) с хлорамфеникол
  • 2.4 Декстроза Sabouraud Emmons агар с циклохексимид
  • 2.5 Декстрозен Sabouraud агар (Emmons) с хлорамфеникол и циклохексимид
  • 2.6 Други антибиотици, които могат да се добавят
• 3 Специални съображения
• 4 Контрол на качеството
• 5 Използване
  • 5.1 Първично култивиране
  • 5.2 Спорулиране
  • 5.3 Опазване
  • 5.4 Микрокултури
  • 5.5 В човешката микология
  • 5.6 Микология на животните
  • 5.7 Микология на околната среда
  • 5.8 Индустриална микология
  • 5.9 Растителна микология
• 6 Препратки

фундамент

Sabouraud декстрозен агар е среда, която в първоначалната си формула е слабо селективна, поради киселинното си рН от 5.6 ± 0.2, въпреки че бактериите могат все още да се развиват, главно при продължителни инкубации..

Средата съдържа казеинов пептон и смляна животинска тъкан от панкреаса, които осигуряват въглеродния и азотния източник за развитието на микроорганизми..

Той също така съдържа висока концентрация на глюкоза, която действа като енергиен източник, благоприятстващ растежа на гъбички над бактериите. Всички смесени с агар-агар, компонент, който осигурява правилната консистенция.

От друга страна, Sabouraud декстрозен агар може да бъде селективен, ако се добавят антибиотици.

С антибиотици тя е особено полезна при проби от рани, открити язви или всяка проба, в която се подозира голямо бактериално замърсяване.

Най-често се използват комбинации от декстрозен агар Sabouraud с антибиотици

-Sabouraud агар с хлорамфеникол: идеален за възстановяване на дрожди и филаментозни гъби.

-Sabouraud агар с гентамицин и хлорамфеникол: в тази среда растат почти всички нишковидни гъбички и дрожди, и инхибира голям брой бактерии, включително ентеробактерии, псевдомонади и стафилококи..

-Sabouraud агар с циклохексимид: той е особено полезен за проби от кожата или дихателните пътища, при условие че подозренията са диморфни гъбички..

Циклохексимид трябва да се използва с повишено внимание; Въпреки че се използва за инхибиране на растежа на непатогенни или екологични гъби и дрожди, които могат да присъстват като замърсители в проба, той също така потиска растежа на някои гъбички, като например Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp и други опортюнистични гъби.

-Sabouraud агар с хлорамфеникол плюс циклохексимид: се използва главно за изолиране на диморфни дерматофити и гъбички. Недостатък е, че инхибира някои видове опортюнистични гъби Candida не е албиканс, Aspergillus, Zygomycetes или C. neoformans.

-Sabouraud агар с хлорамфеникол, стрептомицин, пеницилин G и циклохексимид: той е идеален за проби, изключително замърсени с бактерии и сапрофитни гъби, но има недостатъка, че инхибира растежа на Актиномици и нокардии, освен опортюнистичните гъби, споменати по-горе.

подготовка

Ако имате отделни съставки, можете да го подготвите по следния начин:

Декстрозен агар Сабуро 

Съжалението:

- 40 g декстроза

- 10 g пептон

- 15 g агар-агар

- Измерва се 1000 ml дестилирана вода

Всички съставки се смесват, рН се довежда до 5.6. Разтворите се разтварят чрез кипене, разпределят се 20 ml от средата в тръби с размери 25 x 150 mm, без фланец и с памучно покритие, за предпочитане..

Могат да се използват и други размери на тръбите, в зависимост от наличността.

Те се автоклавират в продължение на 10 минути при налягане в атмосфера (121 ° С). Не превишавайте времето за автоклавиране. При напускане на автоклава, тръбите се накланят с опора, докато се втвърдят в пика на флейта..

Друг начин е да се разтворят съставките чрез нагряване, докато кипи. В същия автоклав фиола в продължение на 10 минути и след това се разпределят 20 ml в петри.

Ако има налична среда на декстрозна агар Sabouraud, която вече съдържа всички съставки, ще преминем към теглото на количеството, определено от търговската къща за един литър вода. Останалите стъпки са същите като описаните по-горе.

Декстрозен агар Sabouraud (модификация на Emmons)

Съжалението:

-  20 g декстроза

- 10 g пептон

-  17 g агар-агар

-  Измерва се 1000 ml дестилирана вода

Всички съставки се смесват, рН се регулира на 6.9. Продължете по същия начин, както в предишния случай.

Има търговски къщи, които предлагат среда с всички съставки. В този случай се претегля и се приготвя, както е описано в вложката.

Sabouraud декстрозен агар (модификация на Emmons) с хлорамфеникол

Основен разтвор на хлорамфеникол

- Претеглят се 500 mg база хлорамфеникол

- Измерва се 100 ml 95% етанол

- смесвам

Sabouraud декстрозна агарова среда (Emmons) се приготвя, както е описано по-горе, и допълнително, за всеки литър среда, се добавят 10 ml изходен разтвор на хлорамфеникол преди автоклавиране..

Декстрозен агар Sabouraud Emmons с циклохексимид

Циклохексимиден изходен разтвор

- Претеглят се 5 g циклохексимид

- Измерва се 100 ml ацетон

- смесвам

Средата Sabouraud декстроза агар (Emmons) се приготвя, както вече беше описано, и допълнително за всеки литър среда се добавят 10 ml циклохексимиден изходен разтвор преди автоклавиране..

Sabouraud декстрозен агар (Emmons) с хлорамфеникол и циклохексимид

Sabouraud декстрозна агарова среда (Emmons) се приготвя, както е описано по-горе и допълнително за всеки литър среда се добавят 10 ml изходен разтвор на хлорамфеникол и 10 ml циклохексимиден изходен разтвор преди автоклавиране..

Други антибиотици, които могат да се добавят

20 000 до 60 000 единици пеницилин на литър среда.

30 mg стрептомицин на литър среда.

И двете трябва да бъдат включени след автоклавиране на средата, леко охладена (50-55 ° C).

0,04 g неомицин на литър среда.

0,04 g гентамицин на литър среда.

Специални съображения

За безопасност е за предпочитане Sabouraud декстрозен агар да се засажда в клиновидна тръба (наклонена във флейта), а не в петриеви панички, за да се избегне диспергиране и вдишване на спорите..

Важно е тръбите със сабуроуден агар да бъдат покрити с памук, а не с винтова капачка, тъй като е доказано, че семианеробните условия възпрепятстват образуването на спори в някои щамове, например Coccidioides immitis. Освен това повечето гъбички са аеробни.

Ако използвате винтова капачка, не затваряйте плътно.

Контрол на качеството

Подготвената среда трябва да има качествен контрол, за да провери правилното им функциониране. За тази цел са засети определени контролни щамове.

За Sabouraud декстрозен агар с хлорамфеникол могат да се използват АТСС щамове. Candida albicans, които трябва да имат отличен растеж. Друга плака се инокулира със щамове от Escherichia coli, трябва да бъде напълно потиснато.

Неинокулирана плоча се инкубира, в която не трябва да расте микроорганизъм.

Sabouraud декстрозен агар с хлорамфеникол и циклохексимид могат да бъдат използвани щамове на  Trichophyton mentagrophytes, трябва да се развиват добре. Друга плака се инокулира със щам Aspergillus flavus, в който трябва да има малък растеж или никакъв растеж. Освен това, неинокулирана плоча се инкубира, за да се демонстрира нейната стерилност.

За Sabouraud декстрозен агар с циклохексимид, щамове на Candida albicans, Trichophyton rubrum  или Microsporum canis, които трябва да покажат добър растеж.

По същия начин, щам на Aspergillus flavus, които показват оскъден растеж или няма растеж. Накрая се инкубира неинокулирана плоча за контрол на стерилността.

приложения

Първична култивация

Класическият декстрозен агар Sabouraud съдържа 4 грама декстроза и е отличен като основна изолираща среда, тъй като показва характерната морфология на всяка гъба..

Също така е отлично да демонстрира производството на пигменти. Въпреки това не е най-подходящото средство за наблюдение на спорообразуването.

Също така не се препоръчва да расте Blastomyces dermatitidis, което се инхибира от високата концентрация на наличната глюкоза.

От друга страна, за култивирането трябва да се имат предвид някои съображения.

Някои гъби се развиват по-добре при стайна температура, като плесени, други се развиват успешно при 37 ° C, като някои дрожди, а други могат да се развият при двете температури (диморфни гъби).

По тази причина, понякога е необходимо да се използват няколко съдове от агар за Sabouraud за същата проба, тъй като те често се засаждат в два екземпляра, за да се инкубира една плоча при стайна температура и друга плоча при 37 ° С..

Например, Sporothrix schenckii засява се в две плочи; единият се инкубира при стайна температура, за да се получи фазата на мухъл, а другата се инкубира при 37 ° С за получаване на подобна на дрожди фаза, но в последната е необходимо да се добавят 5% кръв към средата.

В други случаи, както и в проби от мицетоми, се засяват две плочи от агара Sabouraud, единият с хлорамфеникол, а другият с циклохексимид. Първият ще позволи нарастването на причинителите на мицетом на гъбичен произход (Eumicetoma) и втория причинител на мицетоми с бактериален произход, като актиномикоти..

образуване на спори

Акварият декстроза Sabouraud, модифициран от Emmons, съдържа 2 грама декстроза и се използва не само за изолиране, но и за спорулиране и консервиране на гъбички..

В тази среда, ако можете да възстановите щамовете на Blastomyces dermatitidis.

съхраняване

За запазване на гъбичните култури може да се съхранява в хладилник (2-8 ° C). Времето за съхранение може да варира от 2 до 8 седмици. След този период те трябва да бъдат субкултивирани, за да повторят процеса.

Някои гъби се поддържат най-добре при стайна температура, като например Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum и Microsporum audounii.

Поддържането на щама може да бъде удължено, за да се избегне плеоморфизъм, ако декстрозата е напълно отстранена от агара и ако количеството агар в средата е намалено, за да се избегне сухота.

микро-култури

За идентифициране на някои филаментозни гъби е необходимо да се извършват микрокултури с помощта на агар или други специални средства на Sabouraud за наблюдение на структурите на сексуалното и безполовото размножаване..

В човешката микология

Използва се основно за диагностика на гъбични заболявания, особено тези, които засягат кожата и нейните прикрепвания (коса и нокти).

Пробите могат да бъдат секрети, ексудати, кожа, коса, нокти, храчки, CSF или урина. Най-често изолираните патогени са дерматофити, гъбички, които причиняват подкожни и системни гъбични инфекции.

Микология на животните

Животните често са засегнати от гъбични инфекции, така че агара Sabouraud е толкова полезен при животни, колкото и при човешката микология..

Например, дерматофитите често могат да засегнат животни. Такъв е случаят на Microsporum canis, често инфектира кучета, котки, коне, прасета и маймуни. също, Microsporum gypseum инфектира кучета, котки и говеда.

Птици като пилета, петли и пилета са засегнати от Microsporum gallinae.

Други гъби, като Zymonema farciminosum, те също са причина за заболяване при животни, главно при коне, мулета и магарета, предизвиквайки важно възпаление в лимфните съдове..

Sporothrix schenkii и Histoplasma capsulatum засяга домашните и човешките животни.

Микология на околната среда

Много патогенни или опортюнистични гъби могат да бъдат концентрирани във всеки даден момент в дадена среда, особено в операционни зали и интензивни отделения (ICU) на клиники и болници. Следователно е необходимо да ги контролираме.

Други уязвими места са библиотеките и старите сгради, които могат да бъдат засегнати от концентрацията на екологични гъби.

В проучванията на околната среда се използва Sabouraud декстрозен агар за изолиране на гъбички.

Индустриална микология

Sabouraud декстрозен агар не може да липсва за изследване на гъбични замърсители в производството на козметика, храни, напитки, кожа, текстил, между другото.

Растителна микология

Растенията също страдат от заболявания, причинени от гъбички, засягащи различни части на растението, които дори могат да сложат край на реколтата, причинявайки големи загуби в земеделието..

препратки

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Микробиологична диагностика на микозите и изследване на чувствителността към противогъбични средства. Препоръки на Испанското дружество по инфекциозни болести и клинична микробиология. Достъпни на адрес: coesant-seimc.org
2. Лаборатория ValteK. (2009 г.). Sabouraud декстрозен агар с циклохексимид. Достъпни на: andinamedica.com.
3. Наваро О. (2013). Ветеринарна микология. Национален аграрен университет. Никарагуа.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Аржентина. Panamericana S.A Редакция
5. Касас-Ринкон Г. Обща микология. 1994. Второ издание на Universidad Central de Venezuela, Библиотечни издания. Венецуела, Каракас.