Основа, подготовка и употреба на соев агар

на триптиказейн соев агар или соев агар от триптиказа е твърда, неселективна и питателна хранителна среда. Той е обозначен с буквите TSA за неговия акроним в английския Trypticase Soy Agar. Състои се от триплей, соев пептон, натриев хлорид и агар-агар.

Поради високата си хранителна сила, той е идеален за отглеждане на умерено взискателни и неефективни микроорганизми. Средата без допълнителни добавки не се препоръчва за първични култури, но е много полезна за субкултивиране на чисти щамове и поддържане на тяхната жизнеспособност..

Също така, този агар служи като основа за приготвянето на обогатена среда, като например кръвен агар, особено когато е необходимо да се наблюдават моделите на хемолиза и да се монтират таксони на оптоквин и бацитрацин, необходими при диагностицирането на Streptococcus pneumoniae и Streptococcus pyogenes съответно.

От друга страна, когато се комбинира с антибиотици е полезно да се изолират факултативни и строги анаеробни микроорганизми с клинично значение от проби със смесена флора..

И накрая, съставът на соевия агар триптиказеин и неговото изпълнение отговарят на изискванията, установени от различните фармакопеи (европейски, японски и северноамерикански).

индекс

• 1 Фондация
• 2 Подготовка
  • 2.1 Пластини от агар с трифтацеинов соев агар
  • 2.2. Тарелки с агар с триптиказеин, допълнени с кръв
  • 2.3. Тарелки с агар за триптиказеин със соя, допълнени с нагрята кръв
  • 2.4 Клинове на соев агар триптиказин
• 3 Използване
• 4 Размножена
• 5 Контрол на качеството
  • 5.1 Контрол на стерилността
  • 5.2 Контрол на растежа
  • 5.3 Контрол на растежа и модела на хемолизата на соевия агар триптиказеин, допълнен с кръв
• 6 Препратки

фундамент

За правилното развитие на бактериите е необходимо наличието на енергийни вноски, като аминокиселини, витамини, пуринови бази и пиримидни.

В този смисъл, triptein и соев пептон осигуряват тези хранителни вещества на микроорганизмите, като по този начин позволяват тяхното пълно развитие. Въпреки това, за взискателни бактерии е необходимо да се допълни този агар с дефибринирана кръв или нагрята кръв, за да се увеличи обогатяването му.

От друга страна, ако към средата се добавят антибиотици, тя става селективна среда. Можете също да добавите 0.6% екстракт от дрожди, за да се подпомогне изолирането на видовете от рода Listeria, като се добави цистинов телурит. и Агнешката кръв е идеална за Corynebacterium diphteriae.

Накрая, натриевият хлорид дава осмотичния баланс на средата и агарът осигурява твърдата консистенция.

подготовка

Пластини от агар с триптиказеин

За приготвяне на соев агар с триптиказеин, 40 грама от дехидратираната търговска среда трябва да се претеглят в цифров мащаб. Разтваря се в литър дестилирана вода, съдържаща се във фиола.

Сместа се оставя да престои 5 минути и след това се довежда до източник на топлина, за да се подпомогне разтварянето на средата. Трябва да се разбърква често и да се остави да ври 1 или 2 минути. След това средата се стерилизира в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути.

Оставя се да се охлади до 50 ° С и се разпределя в стерилни петриеви панички. Нека се втвърди, обърни, поръча в плочки и се съхранява в хладилник.

Крайното рН на средата трябва да бъде 7.3 ± 0.2.

Трябва да се има предвид, че цветът на дехидратираната хранителна среда е светло бежова и трябва да се съхранява между 10 и 35 ° C, на сухо място.

От своя страна агарът е леко кехлибарен. Приготвените плаки трябва да се съхраняват в хладилник (2 до 8 ° C) до употреба.

Плаките трябва да достигнат стайна температура, преди да бъдат използвани.

Плаки за агар с триптиказеин соя, допълнени с кръв

Кръвен агар се приготвя чрез прибавяне на 5% дефибринирана кръв по време на охлаждане на соевия агар триптикозаин при 50 ° С. Сместа се хомогенизира чрез въртене с леки движения.

Сервирайте в стерилните петри. Цветът на средата трябва да бъде черешово червен.

Плаки с агарен агар с триптиказеин, допълнени с нагрята кръв

За да се приготви кръвен агар на базата на TSA, описаните по-горе процедури са същите, но при напускане на автоклава се оставя да престои, докато температурата на средата е приблизително между 56 и 70 ° С. По това време кръвта се поставя и се смесва, докато средата стане кафява.

Сервирайте в стерилни петриеви блюда. Цветът на средата е шоколадово-кафяв.

Клинове на трифтиказенов соев агар

Процедурата за приготвяне на агара е същата като описаната за плочите, с тази разлика, че вместо да се сервира средата върху петриеви панички, тя се разпределя между 10 и 12 ml в епруветки с бакелит, преди да се стерилизира..

След това тръбите се автоклавират при 121 ° С в продължение на 15 минути. Когато напускат, те се накланят с помощта на опора и се оставят да се втвърдят.

Подготвените клинове се засяват на повърхността и служат за поддържане на определени неефективни жизнеспособни микроорганизми за определено време.

приложения

Трифтаказин соевият агар се използва в следните случаи:

-Като основа за приготвяне на класически кръвен агар, който се използва рутинно в повечето лаборатории.

-Изолирането на взискателни бактерии.

-Наблюдение на модела на хемолиза.

-Изпълнение на диагностични тестове.

-Като основа за приготвяне на специален кръвен агар Corynebacterium diphteriae, с телуров цистин и Агнешка кръв.

-Като основа за приготвяне на агамен кръвен агар, повече канамицин-ванкомицин за растежа на анаероби, особено Bacteroides sp.

-За поддържане на ненатоварващи щамове (Bacterioteca).

-Микробиалното аеробно преброяване в микробното ограничаване на водата, околната среда, пробите от храни и козметика.

засадени

Пробите могат да бъдат засяти директно върху повърхността на соевия агар триптиказеин, допълнен с кръв или други добавки. Посято е чрез изтощение.

Като има предвид, че плочите от агар с триптиказеин соя без добавки обикновено се използват за субкултура на микробни щамове (бактерии или дрожди).

Контрол на качеството

Контрол на стерилитета

За да се провери стерилността на различните среди, приготвени с триптиказеинов соев агар, се препоръчва да се направи следното: от всяка подготвена партида една или две плаки или епруветки трябва да се инкубират без инокулация при 37 ° С за 24 часа, за да се демонстрира стерилност. Във всички случаи тя трябва да остане без растеж.

Ако се открие замърсяване, цялата партида трябва да се изхвърли.

Контрол на растежа

За изследване на правилното функциониране на триптиказеинов соев агар могат да се използват следните бактериални щамове: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 и Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Щамовете се засяват и инкубират в аеробиоза при 37 ° С за 24 часа.

Във всички случаи растежът трябва да бъде задоволителен.

Можете също да използвате гъбите като комплекс Candida albicans ATCC 10231 и Aspergillus niger ATCC 16404. Добър растеж се очаква и за двата щама.

Контрол на растежа и модел на хемолиза на агар с триптиказеин соя, допълнен с кръв

За да се провери правилното функциониране на кръвен агар, приготвен с тази основа, могат да се използват следните щамове: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 и Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Те се засяват и инкубират при 37 ° С в микроаерофилус за 24 часа.

Във всички случаи растежът трябва да бъде задоволителен, като се има предвид това в S. pyogenes бета-хемолиза (ясен хало около колонията) и в двата щама на S. pneumoniae трябва да се наблюдава алфа хемолиза (зеленикав ореол около колониите).

препратки

1. Уикипедия. Триптиказа Аз съм агар. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 17 декември, 2018, 15:47 UTC. Достъпни на адрес: https://en.wikipedia.org
2. Laboratories Britania. Тритинов соев агар. 2015. Налично на: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Соя триптих. Предлага се на адрес: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Аржентина. Panamericana S.A Редакция.
5. BD Laboratories Триптиказа Аз съм агар. 2014. Налично на: .bd.com