Основа, подготовка и употреба на агар TCBS

на TCBS агар е високо селективна и диференциална твърда хранителна среда, използвана за изолиране и култивиране на Vibrio бактерии, особено Vibrio cholerae, V. vulnificus и V. parahaemolyticus като основни патогени от този род.

Акронимът TCBS означава тиосулфатен цитратен жлъчен захароза. Този агар е известен също като селективна среда за Vibrios. Първоначалната формула е създадена от Nakanishi и по-късно модифицирана от Kobayashi.

Състои се от дрождев екстракт, месен пептон, трипетин, натриев цитрат, натриев тиосулфат, вол жлъчка, захароза, натриев хлорид, железен цитрат, бромотимолово синьо, тимолов син и агар.

Този състав позволява адекватно развитие на вибриовите видове от вода, фекалии и проби от храни; с изключение на Vibrio hollisae, което не расте в тази среда. В допълнение, средата на TCBS е способна да инхибира растежа на други придружаващи бактерии, особено колиформи.

Поради тежките стомашно-чревни и екстра-чревни проблеми, които произвеждат някои видове от рода Vibrio, тяхната диагноза е много важна. Човекът се заразява главно от консумацията на сурова или недохранена морска храна или замърсена вода, но също и чрез заразяване на рани..

Поради това клиничните лаборатории трябва да включват TCBS агар в изследването на културите на изпражненията на течни проби от изпражненията, особено с появата на оризова вода. Особено ако пациентът съобщава, че е бил в контакт с морска вода или е консумирал морски дарове или риба.

индекс

• 1 Фондация
• 2 Подготовка
• 3 Използвайте
• 4 Размножена
• 5 Ограничение
• 6 Контрол на качеството
• 7 Препратки

фундамент

Хранителният източник на тази среда са дрождеви екстракти, месни пептони и трипини. Въпреки това, TCBS агарът е негостоприемна среда за повечето бактерии.

Неговата висока селективност се дава чрез добавяне на натриев цитрат и волска жлъчка; и двете са инхибиторни агенти, които също осигуряват алкално рН на средата, ограничавайки растежа на съпътстващата флора и благоприятстващи растежа на V. cholerae, сред другите видове. Трябва да се отбележи, че Vibrio cholerae е много чувствителен към киселини.

От своя страна, натриевият хлорид балансира осмотично към средата. Освен това, тъй като концентрацията му е висока, тя също действа като инхибиращ агент, благоприятстващ растежа на халофилни бактерии.

Захарозата е ферментиращата захар, която заедно със сините индикатори за рН на бромотимол и тимол син дава различния характер на средата. По тази причина, с това означава, че е възможно да се диференцират ферментиращите щамове щамове от неферментиращи щамове.

Колониите от ферментационните щамове на захарозата развиват жълт цвят и ще превърнат средата от зелено в жълто поради производството на киселини. Неферментните растения стават полупрозрачни, а средата остава оригиналния цвят (зелен).

Също така, тази среда съдържа натриев тиосулфат като източник на сяра и фери цитрат като разкриващо средство. И двете показват бактериите, способни да произвеждат сероводород (безцветен газ). H₂S се образува от тиосулфата и по-късно при взаимодействие с железен цитрат се образуват видими черни утайки.

Накрая, агарът е това, което придава твърда консистенция на средата.

подготовка

Претеглят се 89 g от дехидратираната среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Помощ за разтваряне чрез нагряване и често разбъркване. Сместа може да се вари 2 минути.

Тази среда не се автоклавира. След разтварянето му се сервира директно върху стерилни плаки. Когато се втвърдяват, те се подреждат по обратен начин в създателите на плаки и се съхраняват в хладилник (2-8 ° C), докато се използват.

Средата след приготвяне трябва да бъде при рН 8,6 ± 0,2.

Цветът на дехидратираната среда е светло бежово или зеленикаво-бежово, а цветът на средата е горски зелен или синкаво-зелен.

Важно е да се остави темперирането на плочите преди сеитбата на пробите.

употреба

Най-често срещаната проба за изолиране на Vibrios са диарийни изпражнения.

Пробите за изпражнения, ако не могат да бъдат посяти незабавно върху селективната среда, трябва да бъдат транспортирани в средата на Cary Blair.

За да се повиши чувствителността на културата, фекалиите могат да бъдат пропуснати през пептон вода при рН 8.4 като среда за обогатяване за максимум 8 часа, от там тя се субкултивира в средата на TCBS..

Трябва също да се има предвид, че някои щамове на Vibrios могат да причинят септицемия при имуносупресирани пациенти, така че те могат да бъдат изолирани от кръвни култури. Също така, проби от вода и храна от морето могат да бъдат анализирани, когато има епидемични огнища на холерна болест.

засадени

Инокулумът на изследваната проба трябва да бъде забележим, засяването се извършва по метода на изпотяване. Плаките се инкубират при 37 ° С в продължение на 24 часа при аеробиоза.

Предполагаемите колонии на Vibrio cholerae Те са средни, гладки, непрозрачни, с тънки ръбове и жълти, защото ферментират захароза..

По подобен начин, вида на V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii и някои V. vulnificus. Други видове Vibrios клинично важни като V. parahaemolyticus не ферментира захароза, развивайки се като маслиненозелени колонии.

От друга страна, трябва да имаме предвид, че някои щамове Aeromonas и Plesiomonas, които са оксидаза (+), могат да растат в тази среда, развивайки жълти колонии, които могат да объркат клинициста. Докато някои щамове на Pseudomonas също оксидаза (+) растат като зелени колонии, както и V. parahaemolyticus.

ограничение

Оксидазният тест, който е положителен за рода Vibrio, никога не трябва да се извършва от колонии, получени от TCBS агар, тъй като полученият резултат ще бъде фалшиво отрицателен. Съединенията в средата се намесват силно в този тест. Ето защо, това трябва да се направи от субкултури на кръвен агар.

Контрол на качеството

За да се докаже, че средата е в добро състояние, е препоръчително да се засаждат известни или сертифицирани контролни щамове и да се наблюдава дали растежът отговаря на очакваните характеристики.

За тази цел, щамовете на:

-Vibrio cholerae - Задоволителен растеж (жълти колонии, полупрозрачна граница).

-Vibrio parahaemolyticus - Задоволителен растеж (колония със зелен център и прозрачна граница).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - задоволителен растеж (жълти колонии с ореоли от един и същи цвят около колонията).

-Enterococcus faecalis АТСС 29212 - пълно или частично инхибиране (малки жълти или полупрозрачни колонии).

-Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 - частично или пълно инхибиране (сини колонии).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Напълно инхибирано.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Общо или частично инхибиране. (Център за малки колонии зелен прозрачен ръб).

Инкубирането на неинокулирана среда не трябва да се променя.

препратки

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS агар. 2009. Налично на: f-soria.es
2. BD Laboratory. BD. TCBS Agar 2003. Наличен на: bd.com
3. Laboratories Britania. TCBS среда. 2015. Налично на: britanialab.com
4. Acumedia Laboratories TCBS агар. 2016. Достъпни на адрес: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.