Основа, подготовка и употреба на агар Тейер Мартин

на Агар Тейър Мартин Тя е изключително питателна и селективна твърда среда за изолиране на Neisseria meningitidis и Neisseria gonorrhoeae; и двете известни като патогенни или клинично значими Neisseria.

Една от най-важните особености на агара Thayer Martin е високото му съдържание на хранителни добавки. Това свойство е необходимо, тъй като Neisserias са много взискателни микроорганизми от хранителна гледна точка и следователно не растат в обичайните среди..

От друга страна, тъй като тези микроорганизми обикновено се намират в нестерилни области, е необходимо добавянето на инхибитори, които възпрепятстват растежа на съпътстващата флора, без да се засяга развитието на рода Neisseria..

Този агар се състои от GC основен агар, хемоглобин, допълнителни хранителни добавки и комплекс от инхибиторни вещества (антибиотици и противогъбични средства). Търговските къщи продават всяка от добавките отделно.

Пробата, която се засажда в тази среда, ще зависи от търсения микроорганизъм. за Neisseria гонорея Идеалните проби са вагинални и уретрални секрети. Докато за Neisseria meningitidis най-използваните проби са CSF, фарингеални и назофарингеални ексудати.

индекс

• 1 Фондация
  • 1.1 GC основен агар
  • 1.2 Хемоглобин
  • 1.3 Добавка за обогатяване
  • 1.4 Инхибитори
• 2 Подготовка
  • 2.1 Оригинален агар Тейър Мартин
  • 2.2 Агар Тейър Мартин модифициран
• 3 Използвайте
• 4 Контрол на качеството
• 5 Ограничения
• 6 Препратки

фундамент

Neisserias са микроорганизми, класифицирани като досадни и затова тяхната изолация е трудна. Поради тази причина, Thayer Martín е сложна среда и всеки от неговите компоненти изпълнява функция, която е обяснена по-долу:

GC ядрен агар

GC агар съдържа протеозен пептон, царевично нишесте, натриев хлорид, дикалиев фосфат, монокалиев фосфат и агар-агар. Нейните компоненти осигуряват основните хранителни вещества за развитието на микробите, неутрализират токсичните мастни киселини, допринасят за поддържане на осмотичния баланс, определят рН и осигуряват стабилна консистенция на околната среда..

хемоглобин

Хемоглобинът осигурява фактори V и X (съответно никотинамид аденин динуклеотид NAD и хемин). Ето защо, в тази среда, Haemophilus видове също растат. Хемоглобин може да бъде получен в търговската мрежа в дехидратирана форма или към средата може да се добави прясна дефибринирана кръв от говедо..

Добавка за обогатяване

От друга страна, към средата на Thayer-Martin трябва да се добави добавка за обогатяване, тъй като хранителните вещества, съдържащи се в основния агар, не са достатъчни за изискванията на рода Neisseria..

Най-често използваната добавка за обогатяване се нарича isovitalex. Съдържа глутамин, аденин, NAD, кокарбоксилаза, гуанин, железен нитрат, р-амино бензоена киселина, витамин В12, тиамин и глюкоза. Всички тези съединения са необходими за правилното развитие на патогенна Neisseria.

инхибитори

Тъй като това е силно питателна среда, инхибиторите трябва да се използват, за да се предотврати растежа на микроорганизми от обичайната флора на района и по този начин да се подпомогне изолирането на рода Neisseria..

Инхибиторният комплекс се състои от ванкомицин, колистин и нистатин. Ванкомицин инхибира растежа на Грам-положителни бактерии, колистин предотвратява развитието на Грам-отрицателни бактерии като Pseudomonas и някои сапрофитни Neisseria, а нистатин действа върху дрождите като Candida albicans.

Обаче след това Thayer Martin агар беше модифициран; промените се състоят в добавянето на триметоприм, увеличаването на количеството агар и добавянето на допълнителна глюкоза. Тези промени значително подобриха възстановяването на видовете Neisseria gonorrhoeae.

Трябва да се отбележи, че триметоприм инхибира растежа на рода Proteus и произтичащото от него образуване на рояване. В този смисъл, антибиотиците са това, което осигурява селективната природа на средата Thayer Martin.

подготовка

Оригинален агар Тейър Мартин

-GC агар

Претеглят се 8,2 g дехидратирана GC среда и се суспендират в 100 ml. Смесва се и се вари в продължение на 1 минута с често разбъркване, за да се разтвори в своята цялост. Сместа се стерилизира в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути.

-2% хемоглобин

Суспендират се 2 g дехидратиран хемоглобин в 2 или 3 ml гореща дестилирана вода, за да образуват еднаква смес. Добавете малко по малко вода, за да завършите обем от 100 ml. Суспензията трябва да бъде хомогенна преди стерилизиране.

Стерилизирайте в автоклав за 15 минути.

-Добавка за обогатяване

Възстановете търговския път с разредителя, осигурен от същата търговска къща. Разбъркайте добре. Количеството на разредителя, което ще се използва, ще бъде посочено в инструкциите за комплекта..

-Добавка за инхибиране V.C.N (ванкомицин, колистин, нистатин)

Разтворете флакона с разредителя, осигурен от търговската къща. Разбъркайте добре. Количеството на разредителя, което ще се използва, ще бъде посочено в инструкциите за комплекта..

-приготвен

За всеки 100 ml GC агар се процедират както следва:

Когато GC агарът напусне автоклава, оставете да се охлади до температура приблизително 50 ° C и добавете 2 ml от приготвения разтвор на хемоглобин, 2 ml добавка за обогатяване (isobitalex или britalex) и 2 ml добавка за инхибиране. Смесва се и се сервира в стерилни петриеви блюда.

Оставя се да се втвърди и да се съхранява в хладилник до употреба.

Цветът на подготвената среда е червено червено. Крайното рН на средата е 7.2 ± 0.2

Променен агар на Тейър Мартин

Претеглят се 8,2 g дехидратирана GC среда и се суспендират в 100 ml. Добавете 1 g агар и добавете 0.3 g глюкоза. Смесва се и се вари в продължение на 1 минута с често разбъркване, за да се разтвори в своята цялост. Сместа се стерилизира в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути.

Пригответе хемоглобин и добавка за обогатяване, както е описано по-горе.

Използваната инхибиторна добавка е V.C.N.T (ванкомицин, колистин, нистатин, триметоприм).

-приготвен

Продължете както е описано за оригиналния агар от Thayer Martin.

употреба

Тейър Мартин агар трябва да се темперира преди сеитбата на пробите. Най-често използваните проби са фарингеални ексудати, назални ексудати, вагинална, уретрална и / или ректална секреция и CSF..

Използвайте прясно взети проби и направете силен инокулат върху агара. Пробите се засяват директно чрез изхвърляне на материала и след това се нанасят с изчерпване на повърхността.

Плаките се инкубират при 35-37 ° С в продължение на 24 до 48 часа в микроаерофилен съд (5% СО₂). В края на инкубационния период плочите се изследват за малки, сиви и понякога колонии, подобни на лигавици..

Извършете Грам и потвърждаващи биохимични тестове за съмнителни колонии.

Контрол на качеството

За извършване на контрола на качеството на агара на Thayer Martin могат да се използват следните микробиални щамове.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 и Neisseria meningitidis ATCC 13090; в двата щама се очаква задоволително развитие.

Следва да се включат и следните щамове: \ t Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 и Candida albicans ATCC 10231. При всички тях се очаква пълно или частично инхибиране в тази среда.

ограничения

-Трябва да се има предвид, че бактериите, които са устойчиви на използваните инхибитори, могат да растат в средата..

-Има щамове на Neisseria гонорея които могат да бъдат чувствителни към използваната концентрация на ванкомицин. Поради тази причина се препоръчва използването на шоколадов агар, допълнен с изовиталекс паралелно, но без инхибитори.

-Има щамове дрожди, устойчиви на нистатин, които могат да растат в тази среда и да пречат на изолирането на патогенни Neisseria, особено на гонококи..

препратки

1. Диагностични лаборатории на Valtek. Агар Тейър-Мартин 2016. Наличен в: com
2. Laboratories Britania. Тейър Мартин модифицира средата. 2010. Налично на: britanialab.com
3. Уикипедия. Тейър-Мартин агар. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 26 октомври 2017 г., 16:33 UTC. Достъпни на: wikipedia.org4. Достъп 28 февруари 2019.
4. Laboratories Britania. GC агар. 2010. Налично на: britanialab.com.
5. Лаборатории BBL ™ Medium Обогатяване за гъвкави микроорганизми. 1999. Наличен в: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.