Основаване, подготовка и използване на TSI Agar



на TSI агар или железен троен захарен агар е твърда културална среда, която служи като биохимичен тест за насочване на първоначалното идентифициране на грам отрицателни бацили. Той се основава на доказателство за ферментацията на присъстващите захари и производството на сероводород и газ.

Неговият състав и основа са много сходни с теста на Kligler, с тази разлика, че той съдържа само глюкоза и лактоза. Вместо това, както подсказва името, тройното желязо съдържа три ферментиращи въглехидрати: глюкоза, лактоза и захароза..

В допълнение, TSI носител има четири протеинови производни, които го правят много питателен агар: екстракт от дрожди, екстракт от месо, пептон и протеозен пептон. Съдържа и железен амониев сулфат, натриев тиосулфат, натриев хлорид, фенолово червено и агар.

Невъзможността на микроорганизма да ферментира присъстващата в средата глюкоза веднага го изключва от семейството на Enterobacteriaceae. Следователно, този тест е от съществено значение, за да се реши кой път за идентифициране трябва да се вземе за определяне на рода и вида.

Всяка лаборатория решава дали работи с агар с агар или Kligler.

индекс

  • 1 Фондация
    • 1.1 Натриев хлорид и агар
    • 1.2 Индикатор на рН (фенолово червено)
    • 1.3 Протеинови производни (дрождев екстракт, месен екстракт, пептон и протеозен пептон)
    • 1.4 Ферментация на въглехидрати (глюкоза, лактоза и захароза) \ t
    • 1.5 Производство на газ
    • 1.6 Натриев тиосулфат и железен амониев сулфат (производство на сероводород)
  • 2 Подготовка
  • 3 Използване
  • 4 Размножена
  • 5 Ограничения
  • 6 Препратки

фундамент

Всяко от съединенията изпълнява функция в средата.

Натриев хлорид и агар

Натриевият хлорид е необходим за поддържане на осмотичното равновесие на средата. Докато агарът дава твърдата консистенция.

PH индикатор (фенолово червено)

РН на приготвената среда се балансира до 7,3 и рН индикаторът (фенолово червено) става жълт под 6.8. Това означава, че малки количества киселина, получени от ферментацията на захари, ще превърнат средата от червено-оранжево в жълто.

Ако не се получи ферментация, ще се извърши алкализиране на средата чрез използването на пептони, превръщайки се от червено-оранжево в силно червено.

Протеинови производни (дрождев екстракт, месен екстракт, пептон и протеозен пептон)

Когато бактериите метаболизират протеините, присъстващи в агара TSI, се произвеждат амини, които алкализират средата (главно на ниво на скосяване), тъй като реакцията се нуждае от кислород. Амините превръщат рамката в силно червено.

Но това ще зависи от способността на бактериите да ферментират въглехидрати или не.

Ферментация на въглехидрати (глюкоза, лактоза и захароза)

Изследването на ферментацията на захарите може да даде няколко образа и всеки един се интерпретира по различен начин. Интерпретацията на теста разделя микроорганизмите на 3 категории: не-глюкозни ферментатори, нелактозни ферментатори и лактоза / захарозни ферментатори..

Трябва да се отбележи, че количеството на глюкозата в средата е ограничено, докато концентрацията на лактоза и захароза е 10 пъти по-висока..

Бактериите от семейство Enterobacteriaceae и други микроорганизми, ферментиращи глюкоза, ще започнат да ферментират тази захар, защото тя е най-простата въглехидратна енергия..

От друга страна, лактозата и захарозата са сложни въглехидрати, които трябва да се разрушат и да се превърнат в глюкоза, така че да могат да влязат в цикъла на Embden-Meyerhof..

-Неферментиращи глюкозни микроорганизми

Когато инокулираният микроорганизъм не може да ферментира глюкоза, много по-малко може да ферментира други въглехидрати. Следователно тук не се образуват киселини, но има образуване на амин в наклона, дължащо се на използването на пептони.

В този случай откосът се превръща в по-силно червено и дъното на тръбата може да остане непроменено или също може да се алкализира, оставяйки цялата червена тръба.

Интерпретация: K / K означава алкален конец / алкален или неутрален фон

В изображението, което е в началото на статията, вижте изображението на тръбата D.

Този резултат показва, че микроорганизмът не принадлежи към семейството Enterobacteriaceae.

-Неферментиращи микроорганизми на лактоза / захароза

Ако бактериите могат да ферментират глюкоза, но не и лактоза или захароза, ще се случи следното:

Бактерията ще консумира цялата налична глюкоза след около 6 до 8 часа, като е в състояние да подкиселя както фаската, така и Тако; агарът ще е напълно жълт. Но когато глюкозата се изчерпи и не може да се използва лактоза и захароза, бактериите ще започнат метаболизма на протеините..

Тази реакция се нуждае от кислород, следователно разграждането на пептоните се появява на повърхността (фаска). Амините произвеждат алкализиране на рамката, като се превръща в жълто до червено. Тази реакция е доказана при инкубация от 18 до 24 часа.

Тълкуване: K / A означава алкална фаска и киселинен Тако.

В изображението, което е в началото на статията, вижте изображението на тръба Б.

-Ферментиращи микроорганизми с лактоза / захароза

Очевидно, микроорганизмите, способни да ферментират лактоза и захароза, могат да ферментират глюкоза. След изчерпване на минималното количество глюкоза в средата, образуваният пируват започва да се метаболизира, за да образува киселини през аеробния цикъл на Кребс, а в периода от 8 до 12 часа цялата среда ще бъде жълта..

Ако бактерията е способна да разделя лактоза или захароза, киселините ще продължат да се произвеждат и след 18 до 24 часа цялата тръба - клюн и Тако - ще остане жълта..

Трябва да се отбележи, че използването на глюкоза се извършва по два начина: един в аеробна форма в наклона на тръбата, а другият анаеробно в дъното на тръбата..

Интерпретация: А / А означава киселинно косене / дъно на киселина. Тя може да представи газ или не.

В изображението, което е в началото на статията, вижте изображението на тръбата А.

Производство на газ

Някои микроорганизми са способни да произвеждат газ по време на ферментацията на захарите. Газът се доказва в тръбата чрез налягането, което тя упражнява вътре в агара. Налягането причинява образуването на мехурчета или изместването на агара. Понякога образуването на газ може да разруши средата.

Важно е по време на засяването на средата на ТСОС пробиването да се извършва чисто от центъра на агара, докато достигне дъното. Ако пробиването се отклонява към стените на тръбата, то може да предизвика фалшиви положителни резултати при производството на газа, тъй като то ще излезе през неправилно оформения канал.

Производството на газ, както и реакциите, които се случват в агарния скос, се нуждаят от кислород, затова се препоръчва тръбата да бъде покрита с памучен тампон, а ако се използва бакелитен капак, той не трябва да бъде напълно регулиран..

Производството на газ се отчита като положително (+) или отрицателно (-).

Натриев тиосулфат и железен амониев сулфат (производство на сероводород)

Бактериите, способни да произвеждат сероводород (безцветен газ), приемат сярата на натриев тиосулфат, присъстваща в средата. След като се образува Н2S реагира с железен амониев сулфат, произвеждайки железен сулфид (черната утайка се вижда ясно).

Производството на Н2S се отчита като положително (+) или отрицателно (-).

В изображението, което е в началото на статията, вижте изображението на тръбата C.

подготовка

Претеглят се 62,5 g от дехидратирания агар и се разтварят в един литър дестилирана вода.

Загрява се до пълното разтваряне на агара. Сварете в продължение на една минута разбъркване често. Разпределете 4 ml от средата в 13/100 епруветки с памучен капак.

Стерилизира се в автоклав при 121 ° С в продължение на 15 минути. Извадете от автоклава и оставете да лежи по наклонен начин. Трябва да се внимава основата и панелът да са на същото разстояние.

Да се ​​съхранява в хладилник 2-8 ° С. Оставете да се разбърка преди засаждането на бактериалния щам.

Цветът на дехидратираната среда е светло бежово, а приготвената среда е червено-оранжева

Крайното рН на приготвената среда е 7.3 ± 0.2.

приложения

Тестът за ТСОС се използва широко на ниво микробиологична лаборатория. Този тест е от съществено значение за насочване на типа тест, който трябва да се приложи, за да се стигне до идентифициране на рода и вида. Доброто му изпълнение и интерпретация могат да спестят материал и работа.

Ако резултатът е TSI K / K и цитохромоксидазният тест е положителен, е известно, че тестовете трябва да се използват за идентифициране на не ферментиращи грам отрицателни бацили, като Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, наред с други родове. Ако е отрицателна оксидаза, тя е ориентирана към родовете Acinetobacter, Stenotrophomonas и др..

От друга страна, ако се получи ТСОС A / A или K / A и тестът на цитохромоксидазата е отрицателен, колкото повече нитрати се редуцират до нитрити, ще имаме сигурност, че това е микроорганизъм, принадлежащ към семейство Enterobacteriaceae. В този случай идентификационният маршрут ще бъде ориентиран към специфични тестове за тази група бактерии.

От друга страна, ако се получи К / А или А / А изображение и цитохромоксидазният тест е положителен, допълнителните тестове, които трябва да бъдат монтирани, ще бъдат насочени към идентифициране на ферментиращи щамове, които не принадлежат към семейство Enterobacteriaceae, като: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio и Pasteurella.

ТСОС със сероводород, отрицателна оксидаза, ще ръководи идентифицирането на следните родове от семейство Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella или Salmonella.

ТСОС с оскъден или умерен сероводород в алкалната фаска с алкално дъно и положителна оксидаза ще ръководят използването на тестове за идентифициране на грам-отрицателни, неферментиращи бацили, произвеждащи Н2S, като например Shewanella putrefaciens.

И накрая, ТСОС може да се използва за изследване на производството на сероводород в грам-положителни бацили, особено когато се предполага, че Erysipelothrix rhusiopathiae.

засадени

Средата на ТСОС трябва да се инокулира с чисти колонии, изолирани в първични или селективни култури. Ако колонията е взета от селективни среди, които са били засяти с проби със смесена флора, трябва да се внимава да се вземе само повърхността, тъй като в долната част на колонията може да има жизнеспособни щамове, инхибирани в тази среда..

Следователно контурът никога не трябва да се охлажда в селективна среда, за да се вземе колонията и да се инокулира TSI среда.

Засаждането ще се извършва с права линия или игла. Ще бъде направено пробиване, като се внимава той да е през центъра на средата до достигане на дъното, след което засаждането приключва инокулирането на повърхността по зигзагообразен начин. Не правете две пробиви.

Инкубирайте при 37 ° С в аеробиоза за 18-24 часа. Интерпретирайте по това време, нито преди, нито след това.

ограничения

Изпитването за ТСОС следва да се прочете между 18 до 24 часа от инкубацията. Четенето преди това време може да даде фалшиво положително значение на ферментацията А / А. Като има предвид, че отчитането след това време може да доведе до фалшиво отрицателен образ на неферментатора, дължащ се на консумацията на пептони, които алкализират средата.

препратки

  1. Mac Faddin J. (2003). Биохимични тестове за идентификация на бактерии от клинично значение. 3-то изд. Редакция Панамерикана. Буенос Айрес Аржентина.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. 5-то изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
  4. "TSI агар." Уикипедия, Свободната енциклопедия. 10 юли 2018, 08:09 UTC. 10 февруари 2019, 03:33 Налично на: en.wikipedia.org
  5. Laboratories Britania. TSI Агар (железен агар с тройна захар). 2015. Налично на: britanialab.com
  6. BD Laboratories Железен агар с тройна захар (ТСОС Агар). \ T 2003. Налично на: bd.com