Основа, подготовка и употреба на Vogel-Johnson Agar

на Vogel-Johnson агар е твърда, селективна и диференциална културална среда, специално формулирана за изолиране на Staphylococcus aureus. Тази среда е създадена от Vogel и Johnson през 1960 г. от модификацията на глицинов телуритен агар, формулирана през 1955 г. от Зебовиц, Еванс и Нивен..

Модификацията се състои в увеличаване на концентрацията на манитол, присъстващ в средата и при включването на рН индикатор. Настоящата формула е съставена от триплей, дрождев екстракт, манитол, дикалиев фосфат, литиев хлорид, глицин, фенол червен, агар, 1% калиев телуритен разтвор и вода..

Трябва да се отбележи, че има и други средства, които, подобно на агара Vogel-Johnson, са селективни за изолирането на S. aureus, такива като солен манитолов агар и агар на Baird Parker. В този смисъл може да се каже, че основата на агара Vogel-Johnson е смес между соления манитолов агар и агар от Baird Parker..

В първите колонии на S. aureus Те се отличават чрез ферментация на манитол и превръщане на рН индикатора в жълто. От друга страна, във втория S. aureus характеризира се чрез намаляване на телурита до телур и образуване на сиви до черни колонии. И двата свойства се наблюдават в агара Vogel-Johnson.

Тази среда, както и нейните аналози, е полезна за откриване на Staphylococcus aureus в проби от храни, санитарен контрол на промишлени продукти и в клинични проби.

индекс

• 1 Фондация
  • 1.1 Принос на хранителните вещества
  • 1.2 Селективна мощност
  • 1.3 Диференциална мощност
  • 1.4 Осмотичен баланс и втвърдяващ агент
• 2 Подготовка
  • 2.1 1% w / v калиев телуритен разтвор
  • 2.2 Основна среда на агара на Vogel-Johnson
• 3 Използвайте
• 4 Контрол на качеството
• 5 Препратки

фундамент

Принос на хранителните вещества

Средата на Vogel-Johnson съдържа триплет и екстракт от дрожди; двете вещества осигуряват аминокиселини с дълга верига, които служат като източници на въглерод и азот, необходими за растежа на бактериите. Бактериите, способни да растат в тази среда, ще вземат хранителните вещества от тези вещества.

Селективна мощност

Vogel-Johnson agar може да инхибира растежа на грам-отрицателните бактерии и дори някои грам-положителни бактерии, благоприятствайки развитието на коагулазо-позитивни стафилококи. Инхибиращите вещества са калиев телурит, литиев хлорид и глицин.

Диференциална мощност

Веществата, които правят тази диференциална среда са манитол и калиев телурит. Манитолът е въглехидрат, а когато се ферментира, се получават киселини, които превръщат средата от червено в жълто, което се случва благодарение на присъствието на феноловия червен индикатор за рН..

Докато безцветният телурит се свежда до метален без телурид, той приема тъмно сив до черен цвят.

на Staphylococcus aureus ферментира манитол и намалява телурита до телур. Ето защо типичните колонии на S. aureus в тази среда те са сиви или черни, заобиколени от жълта среда.

Бактериите, които растат в тази среда и не намаляват телурита или ферментиращия манитол, ще образуват прозрачни колонии, заобиколени от червена среда, дори по-интензивна от първоначалния цвят, поради алкализирането на средата чрез използването на пептони..

От друга страна, бактериите, които намаляват телурита, но не ферментират манитол, ще растат като сиви или черни колонии, заобиколени от тъмночервен цвят..

Ако средата се приготвя без добавяне на калиев телурит, колониите на S. aureus те ще се развиват като жълти колонии, заобиколени от жълта среда, като например в солен манитолов агар.

Осмотичен баланс и втвърдяващ агент

Дикалиев фосфат поддържа осмотичния баланс на средата и регулира рН до неутралност 7.2. Докато агарът дава твърда консистенция на хранителната среда.

подготовка

1% разтвор на калиев телурит w / v

Този разтвор не е включен в дехидратираната среда, тъй като не може да бъде стерилизиран в автоклав. Поради тази причина той се приготвя отделно и се прибавя към стерилизираната среда.

Някои търговски къщи продават готови за употреба 1% калиев телурит. Ако искате да се подготвите в лабораторията, направете следното:

Претеглят се 1,0 g калиев телурит и се измерват 100 ml дестилирана вода. Телуритът на калия се разтваря в част от водата и след това се допълва количеството вода до достигане на 100 ml. Разтворът се стерилизира чрез филтриране.

Основна среда на агар на Vogel-Johnson

Претеглят се 60 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Сместа се нагрява до кипене, за да се подпомогне пълното разтваряне. По време на процеса на разтваряне средата се разбърква често.

Стерилизирайте в автоклав при налягане 15 фунта и 121 ° С за 15 минути. Отстранява се от автоклава и се оставя да престои, докато средата достигне температура от приблизително 45 до 50 ° С. Добавят се 20 ml от предварително приготвения калиев телуритен разтвор до 1%.

Смесва се и се излива в стерилни петриеви блюда. Оставя се да се втвърди и да се поръча обърнат в плакери за по-късно съхранение в хладилник до употреба.

Крайното рН на приготвената среда трябва да бъде 7.2 ± 0.2.

Преди да засадите проба, изчакайте, докато плочата попадне на околната температура.

Цветът на подготвената среда е червен.

употреба

Въпреки че може да се използва за изолация на S. aureus при всякакъв вид проби се използва предимно за микробиологичен анализ на фармацевтични продукти, козметика и храни.

Препоръчва се инокулантът да е плътен. Засяването може да се извърши чрез напластяване с платинена дръжка или чрез повърхност с шпатула Drigalski.

Плаките се инкубират при 35-37 ° С за 24 до 48 часа при аеробиоза.

Контрол на качеството

За извършване на контрол на качеството на средата Vogel-Johnson могат да се използват следните контролни щамове:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 или Proteus mirabilis ATCC 43071.

Очакваният резултат е следният: за щамовете на S. aureus Удовлетворяващ растеж с черни колонии, заобиколен от жълта среда. за S. epidermidis редовен растеж с полупрозрачни или черни колонии, заобиколени от червена среда.

По същия начин, за Е. coli очаква се, че ще има пълно потискане и за Proteus mirabilis частично или пълно инхибиране; ако расте, ще го прави пестеливо и колониите ще бъдат черни, заобиколени от средно червен цвят.

препратки

1. BD Laboratories. VJ (Vogel и Johnson Agar). 2006. Налично на: bd.com
2. Laboratories Britania. Vogel-Johnson Agar. 2015. Налично на: britanialab.com
3. Laboratories Britania. Калиев телурит. 2015. Налично на: britania.com
4. Himedia Laboratory. Агарна среда Vogel-Johnson. 2018. Предлага се на адрес: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Агарова база Vogel-Johnson. Ръководство за микробиология на Merck. 12-то издание, стр. 502-503. Наличен в: Потребители / Екип / Изтегляния
6. Сътрудници на Уикипедия, "Ágar Vogel Jonhson", Уикипедия до енциклопедичен живот,   disponível em: wikipedia.org.
7. Венецуелски стандарт Ковен 1292-89. (1989). Храните. Изолация и броене Staphylococcus aureus. Предлага се в:sencamer.gob.ve