Основа, подготовка и употреба на вода от пептон

на вода от peptonada това е неселективна течна среда за обогатяване, използвана главно като разредител за хранителни проби или други материали. Това означава, че от химическа гледна точка е много просто, съдържа пептон от месо, натриев хлорид и вода.

Той има определена хранителна стойност, позволяваща обогатяване на пробата. Ако има очукани бактерии, това средство има силата да поправи жизнеспособността. Той е особено полезен при възстановяването на бактерии, принадлежащи към семейството Enterobacteriaceae.

В случай на възстановяване на Salmonellas, се препоръчва използването на буферния вариант на вода от peptonada; Това служи като средство за предварително обогатяване на пробата, в този случай то съдържа други елементи като динатриев фосфат и дикалиев фосфат..

Обикновено водата на пептонада се приготвя при неутрално рН, но има и други варианти, където е необходимо рН да е 8,5 ± 0,2 (алкална), тъй като бактериите, които се изолират, са алкалофилни, като например Vibrio cholerae.

От друга страна, тази среда може да се използва като основна среда за тестове за въглехидратна ферментация.

индекс

• 1 Фондация
• 2 Подготовка
  • 2.1 Домашна подготовка (некомерсиална)
  • 2.2 Приготвяне с използване на търговска среда
  • 2.3. Подготовка за тестове за ферментация
  • 2.4 Други варианти на вода от peptonada
• 3 Използвайте
  • 3.1 Проби от изпражненията
  • 3.2 Хранителни проби
• 4 Контрол на качеството
• 5 Ограничения
• 6 Препратки

фундамент

Пептоните осигуряват хранителните вещества, необходими за бактериалното развитие, особено азотни и късоверижни аминокиселини, докато натриевият хлорид поддържа осмотичния баланс..

В допълнение, средата позволява диспергиране, хомогенизиране и възстановяване на бактериални клетки, които са били повредени от промишлени процеси..

Като разредител той е идеален, ефективно заместващ физиологичния разтвор (SSF) или фосфатния буфер (PBS).

Бактериалният растеж е очевиден, като се наблюдава мътността му.

подготовка

Домашна подготовка (некомерсиална)

Претеглят се 1 g пептон и 8,5 g натриев хлорид, разтварят се в 1 литър дестилирана вода. РН трябва да се коригира до 7.0. За това можете да използвате 1 N натриев хлорид.

Приготвяне с използване на търговска среда

Претеглят се 15 g от дехидратираната среда и се разтварят в един литър дестилирана вода. Сместа се хомогенизира. Ако е необходимо, сместа се кипи в продължение на 1 минута, за да се подпомогне пълното разтваряне. Сервирайте в флакони от 100 ml или в епруветки от 10 ml, ако е необходимо. Автоклавирайте при 121 ° C за 15 минути.

Охлаждайте и използвайте или съхранявайте в хладилник. Крайното рН на средата е 7.2 ± 0.2.

Цветът на дехидратираната среда е светло бежово и подготвен е светло кехлибарен.

Подготовка за ферментационни тестове

Към предишния препарат - преди стерилизирането - трябва да се добавят въглехидрати до крайна концентрация от 1%, плюс индикатор Andrade (киселинен фуксин) или фенолово червено (0.018 g / L). На тръбите трябва да се постави звънец за наблюдение на образуването на газ.

Други варианти на вода от peptonada

-Пептон вода буфериран или буфериран

Съдържа казеинов ензимен хидролизат, натриев хлорид, калиев дихидроген фосфат и натриев хидроген фосфат додекахидрат. Крайното рН е 7.0 ± 0.2.

За приготвянето му се претеглят 20 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър дестилирана вода. Оставете приблизително 5 минути. Загрява се за 1 минута, докато се разтвори напълно.

Изсипете в подходящи бутилки, ако е необходимо. Стерилизирайте с автоклав при 121 ° С за 15 минути.

-Алкална вода

Претеглят се 25 g от дехидратираната среда и се разтварят в 1 литър вода. Продължете както е описано по-горе. РН варира от 8.3 до 8.7.

употреба

Инокулумът се извършва чрез поставяне на пробата директно.

Използва се за разреждане на пробите, особено когато се подозира, че може да има увредени бактерии. Обикновено разрежданията са 1:10 и 1: 100.

Инкубирайте в продължение на 24 часа в аеробиоза при 35-37 ° С.

Проби от изпражненията

За проби от изпражнения, търсещи салмонела, се препоръчва използването на буферирана или буферирана вода като среда за предварително обогатяване..

За да направите това, направете следното:

Ако се образува изпражненията, вземете 1 g проба. Ако те са течни, вземете 1 ml изпражнения и суспендирайте в епруветка с 10 ml буферирана пептонирана вода. В случай на ректален тампон, изхвърлете съдържащия се в тампона материал в епруветката с буферирана пептонирана вода.

Във всички случаи пробата се смесва и хомогенизира много добре.

Инкубира се при 37 ° С в продължение на 18 до 24 часа. Впоследствие се култивират в бульон за обогатяване като бульон от селенит цистин или тетратионатен бульон при 37 ° С в продължение на 18-24 часа. Накрая се култивират в селективни среди за Salmonella, като SS агар, XLD агар, Hektoen агар, наред с други.

Хранителни проби

Пептоновата вода се използва като среда за обогатяване или като обикновен разредител, но ако се търсят видове Salmonella, тя се използва като среда за предварително обогатяване, както вече беше описано..

В храните се извършва следното:

За твърди храни тежат 25 гр от пробата и за течни храни се измерват 25 мл от нея. Тази част се поставя в колби, съдържащи 225 ml пептонирана вода. Пробата се смесва и хомогенизира.

Ако се подозира, че микробното натоварване е високо серийно, могат да се направят разреждания или десетични знаци, за да се улесни преброяването на образуващи колонии единици (CFU).

Броят на разрежданията ще зависи от типа на пробата и аналитичния опит.

Ако напротив се подозира, че микробният товар е много нисък, не е необходимо да се правят разреждания. Впоследствие се субкултивират в селективни среди.

В случай на храна от морето, като например морски дарове, риба, наред с другото, в търсене на Vibrio cholerae или други видове Vibrio, трябва да се използва пептонова вода, коригирана до рН 8.5 (алкална пептонирана вода).

Контрол на качеството

От всяка приготвена партида, една до две епруветки трябва да се инкубират без инокулация за 24 часа при аеробиоза при 37 ° С. В края на времето не трябва да се наблюдава промяна в мътността или цвета.

Също така, добре известни контролни щамове могат да се използват за оценка на тяхната ефективност:

За тази цел могат да се използват следните бактериални щамове: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Във всички случаи се очаква задоволително развитие на микробите, което се наблюдава от мътността на средата.

ограничения

-Дехидратираната среда е много хигроскопична, така че трябва да се пази от влага.

-Средата не трябва да се използва, ако се наблюдава някакъв вид влошаване.

-Дехидратираната хранителна среда трябва да се съхранява между 10 - 35 ° C

-Подготвената среда трябва да се съхранява в хладилник (2-8 ° C).

препратки

1. Камачо А, Джайлс М, Ортегон А, Палао М, Серано Б и Веласкес О. Техники за микробиологичен анализ на храни. 2009, 2nd ed. Химически факултет, UNAM. Мексико. Версия за администратор на ръководства и документи (AMyD) на Химическия факултет, UNAM 1. Достъпни на: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratories Britania. Буферирана вода от peptonada. 2015. Налично на: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Пептонова вода. Предлага се на адрес: foodsafety.neogen.com
4. Laboratories Britania. Пептонова вода. 2015. Налично на: britanialab.com
5. Merck Laboratories Буферирана пептон вода. Достъпни на: merckmillipore.com
6. Лаборатории Конда Пронадиса. Алкална вода. Предлага се на адрес: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.