Основа, подготовка и употреба на бульон тетратионат



на тетрационален бульон или TT бульон е селективна течна хранителна среда за обогатяване и възстановяване на Salmonella щамове. Той е създаден от Мюлер и по-късно е модифициран от Кауфман, поради което има хора, които го наричат ​​бульон Мюлер-Кауфман..

Първоначалната среда съдържа протеозни пептони, калциев карбонат и натриев тиосулфат. Kauffmann добавя жлъчни соли и създава друга модалност с ярко зелено. Тези вещества инхибират растежа на колиформите, оставяйки свободната среда за развитието на патогенни бактерии, в този случай Salmonella.

Модификацията беше много успешна, защото значително повиши чувствителността на средата. Поради това в момента е полезно за търсене на Salmonellas във всякакъв вид проба, но особено за твърди или течни изпражнения и храни..

Неговата подготовка се състои от две фази; търговската среда е основа за приготвяне на тетратионатен бульон, а впоследствие за образуване на тетратионат се добавя йодиран йоден разтвор за завършване на средата.

Американската асоциация за обществено здраве (APHA) препоръчва използването на тетионатен бульон, допълнен с ярко зелено, за обогатяване на проби в търсене на Salmonella, тъй като той е по-селективен от тетратионатния бульон и селенитния бульон..

Като цяло, тетратионатният бульон е идеален, когато се предполага, че бактерии от рода Salmonella са в малки количества или са злоупотребявани с излагане на инхибиторни вещества или чрез промишлени процеси, които минимизират тяхната жизнеспособност..

индекс

  • 1 Фондация
  • 2 Подготовка
    • 2.1 - Тетратионат
    • 2,2-Variante тетратионат бульон с ярко зелено
  • 3 Използвайте
  • 4 Контрол на качеството
  • 5 Препоръки
  • 6 Препратки

фундамент

Настоящите пептони съответстват на казеинови панкреасни разграждания и пептично смилане на животинска тъкан. Те осигуряват източник на въглерод, азот и хранителни вещества като цяло за растежа на бактериите.

От своя страна, натриевият тиосулфат реагира с йодирания разтвор за образуване на тетратионат. Това потиска растежа на колиформите и благоприятства развитието на бактерии, които съдържат ензима тетратионат редуктаза, сред които е род Salmonella, но също и Proteus.

Жлъчните соли действат и като инхибиторно вещество на повечето грам-положителни бактерии и някои грам-отрицателни бактерии (колиформни бактерии)..

Калциевият карбонат поглъща токсичните вещества, генерирани от разлагането на тетратионат, който образува сярна киселина. В този смисъл, калциевият карбонат неутрализира киселинността, поддържайки рН на стабилната среда.

В случая на светлозелената модалност, това вещество увеличава селективната сила на тетратионатния бульон чрез инхибиране на други микроорганизми, различни от рода Salmonella..

подготовка

-Тетрация на бульон

Йоден йоден разтвор

Съжалението:

  • 6 гр йод.
  • 5 гр калиев йодид.

Калиев йодид се разтваря в приблизително 5 ml стерилна дестилирана вода, след което йодът се добавя малко по малко, докато сместа се загрява. След като се разтвори напълно, се напълва със стерилна дестилирана вода, докато достигне краен обем от 20 ml.

Половината база за тетратионатен бульон

Претеглят се 46 грама от дехидратираната среда и се суспендират в 1 литър стерилна дестилирана вода. Разбърква се и се загрява, докато се разтвори напълно, може да ври само за няколко минути. Не стерилизирайте в автоклав. Базата на средата се оставя да се охлади до около 45 ° С и по това време се добавят 20 ml йодиран разтвор..

След добавяне на разтвора йодурада към средата трябва да се използва веднага. Ако не искате да използвате цялата смес, направете следното:

10 ml от основната среда се разпределят в епруветки и само 0,2 ml от йодирания разтвор се добавят към онези, които се инокулират с проби..

Онези, които няма да бъдат използвани, все още могат да се съхраняват в хладилник, но тъй като средата не е стерилизирана, идеалното е да се подготви точната необходима сума..

Цветът на средата преди добавяне на йодирания йоден разтвор е млечнобял с бяла утайка и след добавянето му е кафяв с гъста утайка. Наблюдаваната утайка е нормална и съответства на калциев карбонат, който не се разтваря. Крайното рН на средата е 8.4 ± 0.2.

-Tetrathionate бульон вариант с ярко зелено

За приготвяне на тетратионатния бульон с ярко зелено се провеждат всички стъпки, описани по-горе, но допълнително към сместа се добавят 10 ml от ярко зеления разтвор, приготвен при 0,1%..

Ярко зелено

Този разтвор се приготвя, както следва:

Претеглят се 0,1 g светлозелено и се суспендират в 100 ml дестилирана вода. Загрява се до кипене, за да се постигне пълното му разтваряне. Запазете в кехлибарена бутилка.

употреба

За пробите от изпражненията (културата на изпражненията) протоколът е както следва:

Инокулирайте 1 g твърда изпражнения или 1 ml течен изпражнения в епруветка с 10 ml от готовия за употреба тетратионатен бульон. Разклаща се енергично и се инкубира в аеробиоза при 43 ° С в продължение на 6-24 часа.

Впоследствие, вземете аликвотна част от 10 до 20 μl от бульона и я субкултурирайте в среда, селективна за Salmonella, като SS агар, XLD агар, ярко зелен агар, Hektoen ентеричен агар, между другото..

Успоредно с това, селективните среди за Salmonella трябва да се инокулират с директна проба (изпражнения) без обогатяване. За проби от ректални тампони изтеглете събрания материал в тръбата и продължете, както е описано по-горе.

За хранителни проби се претеглят 10 g твърда храна или 10 ml течна храна и инокулират се бутилка с 100 ml готов за употреба тетратионатен бульон. Продължете по същия начин, както е описано по-горе, но инкубирайте при 37 ° С.

Както може да се види, връзката между пробата и бульона винаги ще бъде 1:10.

Контрол на качеството

За да се тества културалната среда, могат да се използват известни контролни щамове. Най-често използваните щамове са ATCC.

Използваните щамове са Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 и Staphylococcus aureus ATCC 25923.

За щамовете на Salmonella се очаква отлично развитие, докато Escherichia coli може да има слабо или редовно развитие, а Грам положителните щамове (Enterococcus и Staphylococcus) са частично или напълно \ t.

препоръки

-Тъй като тази среда не инхибира растежа на Proteus, някои лаборатории използват 40 mg / L новобиоцин, за да предотвратят развитието на този микробен щам. Антибиотикът трябва да се добави преди йодирания йоден разтвор.

-След приготвяне на средата, включваща йодиран йоден разтвор, тя не трябва да бъде повече от 2 часа след инокулирането.

-В момента на разпределяне на средата в тръбите, сместа трябва да се хомогенизира непрекъснато, за да се ресуспендира образуваната утайка.

-В по-малко замърсени проби тетратионатният бульон се инкубира при 35-37 ° С, а в силно замърсени проби се препоръчва инкубация при 43 ° С..

препратки

  1. Лаборатория Конда Пронадиса. 2010. Основа на тетратионатен бульон според Müeller-Kauffmann. Предлага се в:
  2. BD Laboratories База за бульон тетратионат. Предлага се в:
  3. Laboratories Britania. 2015. Тетионатна основа. Предлага се в:
  4. Media BBL. 2005. Тръбни препарати за отглеждане на видове Salmonella.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld А. (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Редакция Panamericana S.A. Аржентина.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Сравнение между културална среда на натриев селенит и тетратионат на натрий, инкубирани при 37 ° С и 42 ° С за изолацията на Salmonella spp изпражненията на носачите. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220