Дял:
Основа и техники за оцветяване на кинун
на Кинионово оцветяване Това е техника за оцветяване, използвана за оцветяване на киселинно бързи бактерии и киселинни паразити. Тя е родена от модификацията на оцветяването на Ziehl-Neelsen; И двете техники се интерпретират по един и същ начин, но се различават по два елемента: при приготвянето на основния реагент и в това, че техниката Kinyoun не използва топлина..
Поради тази причина тя е известна също като студено модифицирано Ziehl-Neelsen или Kinyoun студено оцветяване. Той е показан за оцветяване на Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, атипични микобактерии, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris и Cyclosporas cayetanensis.
Заслужава да се отбележи, че с тази техника Нокардиа се оцветяват слабо, тъй като те са частично алкохол, устойчив на киселини, така че за този жанр има модификация на методологията..
На свой ред студената техника на Kinyoun беше комбинирана с трихромната техника, модифицирана от Дидие за откриване на кокцидии (Cryptosporidium parvum и Isospora belli) и спори на микроспоридия (Enterocytozoon bieneusi и Encephalitozoon intestinalis).
индекс
- 1 Фондация
- 2 Техника
- 2.1 Материали
- 2.2 Приготвяне на Kinyoun fenicated fuchsin
- 2.3. Приготвяне на алкохолна киселина
- 2.4. Получаване на контрастно багрило с метиленово синьо
- 2.5 Техника на Kinyoun петна
- 2.6 Специална кинуун техника за нокардиите
- 2.7 Комбинирана техника на фенолни и трихромни фуксини, модифицирана от Дидие
- 2.8 Контрол на качеството
- 3 Kinyoun техника в сравнение с техниката на Ziehl -Neelsen
- 4 Справочник
фундамент
Основният оцветяващ реагент е карбол фуксин или фуксин феникада, който има свойството да се свързва с карболовите киселини, съществуващи във восъчната клетъчна стена, богати на липиди (миколови киселини) на микобактерии и някои паразити..
Това съединение не се противодейства от обезцветяване на киселина; следователно, микроорганизмите се определят като киселинно устойчив алкохол.
За разлика от техниката Ziehl-Neelsen - която фиксира боята чрез топлина - в Kinyoun техниката тази стъпка не е необходима, тъй като фенолният фуксинов разтвор, приготвен за тази техника, съдържа висока концентрация на фенол..
Фенолът разтваря липидния материал на клетъчната стена, което позволява влизането на карболовото фуксиново багрило. След проникването на багрилото, тя остава фиксирана въпреки измиването с алкохолна киселина.
По този начин киселинно-устойчивите микроорганизми придобиват характерния червен цвят, докато всичко, което не е киселоустойчив алкохол, се обезцветява и се оцветява в синьо..
техниката
материали
- Модифициран фенолен фуксин.
- Алкохолът оцетна.
- Метиленово синьо.
Приготвяне на Kinyoun fenicated fuchsin
- Основен фуксин: 4 гр.
- Фенол: 8 ml.
- Алкохол (95%): 20 ml.
- Дестилирана вода: 100 ml.
Основният фуксин в алкохол трябва да се разтвори бавно, постоянно да се смесва. След това кристализираният фенол се стопява във водна баня при 56 ° С. След разтваряне се добавят 8 ml към разтвора на фуксин, приготвен по-горе.
Приготвяне на алкохолна киселина
- Концентрирана солна киселина: 3 ml.
- Етанол (95%): 97 ml.
Тя трябва да бъде измерена, съединена и смесена.
Приготвяне на контрастното багрило с метиленово синьо
- Метиленово синьо: 0.3 g.
- Дестилирана вода: 100 ml.
Тя се претегля и разтваря.
Kinyoun петна техника
1- Пригответе намазка директно от пробата, която може да бъде слюнка, белодробна течност, уринен седимент, цереброспинална течност или изпражнения; или от суспензия от микроорганизми, получени от чисти колонии, разработени в първична хранителна среда.
2- Фиксирайте размазването с топлина.
3- Поставете намазка върху оцветяващия мост и го покрийте с приготвения фенолен фуксинов реагент на Kinyoun. Оставете да престои 3 или 5 минути.
4- Измийте с дестилирана вода.
5 - Избелва се с киселинен алкохол в продължение на 3 минути и отново се промива с дестилирана вода.
6. Отбележете отново с киселинен алкохол за 1 или 2 минути, докато не изтеглите повече багрило.
7. Измийте с дестилирана вода и оставете дренажът да се постави в изправено положение.
8. Покрийте препарата с метиленово синьо и го оставете за 4 минути.
9- Измийте с дестилирана вода и оставете въздух да изсъхне.
10. Проучете 40Х и след това 100Х.
Ако искате да подобрите и ускорите оцветяването на киселинно-бързите микроорганизми, добавете 1 капка омокрящ агент (като тергитол № 7) към 30 или 40 ml фенолен фуксин на Kinyoun..
Някои лаборатории променят метиленово синьото контрастно багрило за ярко зелена или пикринова киселина; Първият дава зелен цвят на фона, а вторият - жълт.
Kinyoun техника специална за Nocardias
За подобряване на оцветяването на бактериите Nocardia се използва модификация на Kinyoun оцветяване. Техниката е както следва:
1- Покрийте намазката с Kinyoun fenicated fuchsin за 3 минути.
2 - Измийте с дестилирана вода.
3 - Накратко се избелва с 3% приготвен киселинен алкохол, докато не се вкара повече боя.
4- Измийте отново с дестилирана вода.
5. Покрийте препарата с метиленово синьо и го оставете за 30 секунди.
6. Измийте с дестилирана вода и оставете въздух да изсъхне.
Комбинирана техника на фенолни и трихромни фуксини, модифицирана от Дидие
Тази техника се препоръчва за анализ на проби от изпражнения в търсене на кокцидии и спори на Microsporidium sp в същото време Процедурата, която трябва да се следва, е както следва:
1 - Покрийте намазка с Kinyoun фенол фуксин за 10 минути.
2- Отстранете боята и измийте с дестилирана вода.
3- Отбелява се за 30 секунди с алкохолна солна киселина.
4- Измийте отново с дестилирана вода.
5. Нанесете намазката с трихромен разтвор в продължение на 30 минути при 37 ° C.
6- Измийте с дестилирана вода.
7. Обезцветявайте за 10 секунди с алкохолна оцетна киселина.
8- Измийте намазката за 30 секунди с помощта на 95% етанол.
Контрол на качеството
Като положителна контрола се получават намазки с щамове от Mycobacterium tuberculosis и оцветени с приготвените реагенти, за да се потвърди, че бактериите приемат правилния цвят (червено-фуксия).
Отрицателните контроли могат да се използват и при приготвяне на намазки с всякакъв щам, който не е киселоустойчив алкохол, като по този начин се проверява, че цялата проба е с цвета на контраста.
Kinyoun техника в сравнение с техниката на Ziehl -Neelsen
Техниката на Kinyoun е по-проста, защото елиминира стъпката на нагряване, но основното му предимство е, че предотвратява изпускането на пари, силно токсични и причинява рак в дългосрочен план. Следователно Kinyoun оцветяването е по-безопасно за оцветяване на персонала.
Важно е да се има предвид, че е необходимо да се внимава реактивите да не влизат в пряк контакт с кожата, тъй като те са корозивни и белина е запалим.
По отношение на недостатъците, негативната намазка не означава непременно, че микроорганизмът не присъства. В допълнение, наличието на клетъчен детрит може да доведе до фалшиви положителни резултати, което води до объркване в диагнозата.
препратка
- Приложна клинична химия (2016 г.). BK Kinyoun Kit, наличен на адрес: cromakit.es
- Ороско-Рико Мигел. Kinyoun петна и две Coccidia в ХИВ. Медицински вестник MD. 2011; 3 (2): 137
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Аржентина. Panamericana S.A Редакция.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологична диагноза. (5-то изд.). Аржентина, редакция Panamericana S.A..
- Уикипедия. - Кинуун петно. Уикипедия, Свободната енциклопедия. Уикипедия, Свободната енциклопедия, 8 февруари 2018. Уеб. 5 януари 2019 г..
- Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Прилагане на техника за оцветяване за едновременна диагностика на Coccidia и Microsporidia. Институт по хигиена на републиканския университет. Монтевидео. Уругвай. Предлага се на адрес: higiene.edu.uy