Зацапайте от фундамента, техниката и употребите на Grünwald-Giemsa май



на Може да оцветява Грюнвалд-Гимзе Папенхайм е диференциална оцветяваща техника, която смесва реактивите на Giemsa и May Grünwald. Използва се за диференциране на нормални и абнормни кръвни клетки в петна периферна кръв и костен мозък, както и за оцветяване на хистологични срезове и цитологични проби..

И двата реагента - Gemsa и May Grünwald - са получени от оцветяване от тип Romanowsky, техника, основана на комбинация от киселинни и основни багрила.

Giemsa подобри техниката чрез стабилизиране на сместа от еозин, метиленово синьо и неговите производни с глицерол. За разлика от това, Май Grünwald използва еозин и метиленово синьо, използвайки метанол като разтворител. Тази стратегическа комбинация даде отлични резултати.

Въпреки че по отношение на наблюдението на клетъчната морфология действа подобно на оцветяванията на Giemsa и Wright, тази техника подобрява предишните чрез фина настройка на оцветяването на паразитите, които причиняват малария, болест на Chagas, лейшманиоза и трихомониаза.

Освен това е доказано, че е много полезна техника за цитологичното изследване на течност от сперматозоиди. Той е подчертан не само чрез показване на морфологичните характеристики на сперматозоидите, но също така позволява да се диференцира с голяма ефективност левкоцити, епителни клетки и клетки от сперматогенеза..

индекс

  • 1 Фондация
    • 1.1 Разнообразие от багрила
  • 2 Техника
    • 2.1 Материали
    • 2.2 Концентриран разтвор на багрило Май Grünwald
    • 2.3 Концентрирана боя Giemsa
    • 2.4. Получаване на буферния разтвор при рН 7.2
    • 2.5. Намазка на кръвта или процедура с оцветяване на костен мозък
    • 2.6 Разширен метод на оцветяване на течност от сперматозоиди
    • 2.7 Важни спецификации
  • 3 Използване
    • 3.1 Вагинална цитология
    • 3.2 Проба от сперматозоиди
  • 4 Препратки

фундамент

Техниката следва основите на петната на Романовски, в които киселинните багрила имат селективен афинитет към клетъчните основни компоненти и киселинните компоненти привличат основните багрила.

Обяснени по друг начин, както клетъчните структури, така и багрилата имат положителни или отрицателни електрически заряди; равните такси се отблъскват и се привличат различни такси.

Например, основни багрила като метиленово синьо са положително заредени и са привлечени от отрицателно заредени структури. Ето защо тази боя оцветява ядра, които са богати на ДНК и РНК, които имат отрицателно заредени фосфатни групи.

Гранулите на сегментираните базофили и цитоплазмите на мононуклеарните бели кръвни клетки, съдържащи РНК, също са оцветени..

По същия начин киселинното багрило носи отрицателен заряд, поради което се свързва с положително заредени структури като еритроцитите и гранулите на сегментираните еозинофили. Що се отнася до гранулите на сегментираните неутрофили, те определят и двете багрила.

Разнообразие на оцветители

В тази техника съществуват комбинации от реакции между ортохроматични багрила и метахроматични вещества. Ортохроматиците (еозин и метиленово синьо) се свързват с клетъчната структура, с която са свързани, и осигуряват стабилен цвят, който не варира.

От друга страна, метахроматиците (производните на метиленово синьо лазур А и лазур В), променят първоначалния си цвят, след като са свързани със специфичната структура, а може да има и различни нюанси..

И накрая, стъпката, пренесена от решението на Грюнвалд Май, изисква наличието на вода, защото без нея багрилото ще проникне в структурите, но няма да бъде фиксирано. За да стане това, багрилото трябва да стане полярно или йонизирано и по този начин да може да се утаи и прикрепи към съответните структури.

техниката

материали

- Плъзгачи за слайдове.

- Оцветяващи мостове.

- Решение на May-Grünwald.

- Гимза петно.

- Дестилирана вода.

Концентриран разтвор на багрило Май Grünwald

Трябва да претеглим 0,25 g еозин-метиленово синьо (багрило според May Grünwald) и да се разтворим в 100 ml метанол. След това сместа се разбърква в продължение на 1 час и се оставя да престои 24 часа. Завърши времето, филтрира.

За да се приложи техниката, багрилото май Grünwald трябва да се разреди, както следва: за 200 ml разредено багрило се измерват 30 ml от концентрирания разтвор, добавят се 20 ml буферен разтвор и 150 ml дестилирана вода до рН 7,2-7,3. , След това се смесва и филтрува.

Концентрирана боя Giemsa

Претеглят се 0,5 g азур-еозин-метиленово синьо (багрило според Giemsa), разтварят се в 50 ml метанол и се поставят 50 ml глицерин в сместа..

За да извършите техниката, разредете 1:10 с буферен разтвор и я оставете да престои 10 минути. Може да се филтрира, ако е необходимо.

Приготвяне на буферния разтвор при рН 7.2

Те трябва да бъдат претеглени:

- 40 mg калиев дихидроген фосфат (KH2PO4).

- 151 mg динатриев хидроген фосфат 12-хидрат (Na2HPO4).

И двете съединения се разтварят в 100 ml вода.

Натривка от кръв или процедура с оцветяване на костен мозък

Има два начина: класически и бърз.

Класически режим

  1. Нанесете намазките за 2 или 3 минути с разреден разтвор на May-Grünwald.
  2. Измийте с буферирана дестилирана вода, за да елиминирате предишния разтвор.
  3. Покрива се със същия буфериран промивен разтвор и се оставя за 1 минута. Идеята е, че предишното багрило е фиксирано към структурите и че в същото време клетките са хидратирани.
  4. Добавят се 12 капки от разредената тинктура на Giemsa върху буферираната вода и се разбърква и хомогенизира. Оставете да престои 15 или 20 минути.
  5. Промийте намазките с буферирана дестилирана вода и го поставете на въздух.
  6. Съсредоточете и наблюдавайте в оптичен микроскоп кръвните клетки, оцветени с цел 40Х. Ако е необходимо, може да се използва 100X.

Бърз режим

  1. Покрийте намазката с багрило май Grünwald, разредено за 1 минута.
  2. Измийте с буферирана дестилирана вода.
  3. Покрийте с буферирана вода и оставете да престои 1 минута.
  4. Разреденото багрило Giemsa се поставя в продължение на 5 минути.
  5. Измийте с буферирана дестилирана вода и оставете да изсъхнат на въздух.

Описаните тук техники са ръководство, но трябва да се има предвид, че процедурите и времето за оцветяване варират в зависимост от търговската къща, която доставя реактивите. Препоръчително е да следвате стъпките, строго посочени от всяка търговска къща.

Техника за оцветяване на разширена сперма

1- Нанесете разтвора с тънък слой от разтвора May Grünwald в продължение на 4 минути.

2- Отстранете боята и измийте с дестилирана вода.

3- Поставете слой от разреден Giemsa (1:10) в дестилирана вода за 15 минути.

4- Отстранете боята и измийте с дестилирана вода.

5. Оставете да изсъхне и наблюдавайте под микроскопа.

Важни спецификации

Техниката изисква реактивите и промивните разтвори да имат рН, коригирани до 7.2-7.3, така че афинитетите на багрилата за клетъчните структури да не се нарушават и да не променят очаквания краен цвят..

приложения

Тази техника се използва от клиничните лаборатории за оцветяване на петна от периферна кръв и костен мозък, тъканни участъци и цитологии..

В областта на хематологията тази техника е от жизненоважно значение при изучаването на аномалии на клетките по отношение на форма, размер и брой. Той е много ценен инструмент за диагностициране на някои заболявания като левкемия и анемия.

В допълнение, той представлява изключителна полза при търсене на паразити в хематологичните полета (Plasmodium sp и Trypanosoma cruzi) или хистологичноLeishmanias sp).

Вагинална цитология

Що се отнася до вагиналната цитология, тази техника е особено благоприятна за наблюдението Trichomonas vaginalis. Това е важна констатация, тъй като нейното присъствие симулира картини на карцинома in situ които след това изчезват, когато паразитът се елиминира.

Проба от сперматозоиди

Той е идеален инструмент за изследване на проби от сперматозоиди, тъй като предоставя ценна информация за качеството на спермата.

Данните, които предлага, трябва да се правят предимно с брой и морфология, както и с съпътстващите клетки, които могат да присъстват и които са от жизненоважно значение, като зародишни клетки, левкоцити и епителни клетки..

С този анализ е възможно да се опишат аномалии, наблюдавани в спермата в главата, врата, средната част и основната част.

В допълнение, те могат също да помогнат да се покажат случаи на хемоспермия (наличие на червени кръвни клетки в спермата) и левкоспермия или пиоспермия (увеличаване на броя на левкоцитите в спермата)..

препратки

  1. Costamagna S, Prado M. Валидиране на пресния тест, цветовете на Grünwald-Giemsa и Gram и културална среда за диагностициране на Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Налично в: scielo.
  2. Merck KGaA лаборатория. Нека Grünwald еозин метиленово синьо за микроскопия.
  3. - Петното на Мей-Грюнвалд-Гимзе. Уикипедия, Свободната енциклопедия. 15 ноември 2018 г., 14:37 UTC. 8 Януари 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Лабораторни химикали за стъкло Panreac. Реагенти за хистологични техники, хематология и микробиология. Предлага се на: glasschemicals.com
  5. Retamales Е, Manzo V. Препоръка за оцветяване на кръвните намазки за отчитане на кръвната картина. Национална и референтна биомедицинска лаборатория. Институт по обществено здраве на Чили.
  6. Sarabia L. Spermiogram съгласно критериите на СЗО. Програма за анатомия и биология на развитието. Медицински факултет Чилийски университет Достъпни на: pp.centramerica.com