Негативна основа, техника, предимства и недостатъци

на отрицателно оцветяване Това е специален метод за оцветяване, за да се подчертае наличието на капсулата в някои микроорганизми - главно Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae и Cryptococcus neoformans-, от клинични проби или чисти култури.

Пряката проба, която обикновено се използва за прилагане на отрицателно оцветяване, е цереброспиналната течност. Тази техника представлява бърза алтернатива за предполагаемата диагноза на менингита, особено Cryptococcus neoformans.

По същия начин, това оцветяване може да се прилага върху слюнка и стерилни течности като цяло, както и върху щамове, получени от млади чисти култури. Тази техника използва нигросин или китайско мастило за неговото изпълнение; следователно, това е много проста и икономическа методология за прилагане, която предоставя информация с голяма диагностична стойност за кратко време.

В този смисъл всяка лаборатория може да изпълни това оцветяване. Разбира се, лабораторията трябва да има компетентен персонал, способен да разпознае дрождите на Cryptococcus neoformans Изолира се или се разграничава от левкоцити и артефакти, които пробата може да представи.

индекс

• 1 Фондация
• 2 Техника
  • 2.1 Материали
  • 2.2 Спецификации за вземане на проби
  • 2.3 Изпълнение на техниката с директни проби
  • 2.4 Изпълнение на техниката с щамове от култура
  • 2.5 Наблюдение в микроскоп
• 3 Предимства
• 4 Недостатък
• 5 Оцветяване на тъкани с индийско мастило
• 6 Препратки

фундамент

Нигрозинът и индийското мастило действат по подобен начин; следователно, всяко от двете вещества може да се използва взаимозаменяемо.

Тази техника се нарича отрицателно оцветяване, защото действа в противоречие с останалите техники на оцветяване. В това, което остава неоцветено, е структурата, която се търси или която искате да видите; това са микроорганизмите.

Поради това оцветяването се основава на боядисване на дъното на размазването в тъмен цвят. При този сценарий ограничените структури ще бъдат подчертани в светъл или безцветен цвят.

Най-общо, дрождите се наблюдават рефрентни, заобиколени от ясен ореол, който съответства на капсулата. Това се случва, защото китайското мастило и нигрозин са вещества, които не са в състояние да проникнат в полизахарида, който образува капсулата от живи микроорганизми..

Трябва да се отбележи, че други структури, които могат да присъстват в директната проба, като левкоцити или червени кръвни клетки, не проникват.

Сега, ако микроорганизмите са мъртви, тинктурата може да проникне вътре в тях, по такъв начин, че това оцветяване също е полезно за оценка на жизнеспособността на микроорганизмите..

техниката

материали

нигрозиново

Нигрозинът дължи името си на черния цвят, който има. Това е синтетично вещество, което се получава чрез нагряване на сместа от органични съединения - като нитробензин, анилин и анилин хидрохлорид - като се използва катализатор (желязо или мед) в споменатата реакция..

Китайско мастило

Китайското мастило е вещество, използвано главно от азиатците за писане, правене на произведения на изкуството и монохроматично рисуване. Той е много популярен в китайската култура.

Получава се от калциево мастило, смесено с прахообразни въглища, продукт на изгаряне на малки смолисти дървета.

Възможно е също така да се приготви от саждите на изгарянето на въглеводороди (растителни масла), заедно с протеинов желатин, който му дава правилната консистенция, за да се предотврати утаяването на въглеродните частици.

Спецификации за вземане на проби

- Не изисква гладно.

- Пробата от CSF, слюнка или стерилна течност трябва да съдържа най-малко 1 ml от обема и трябва да се прехвърли на стайна температура в лабораторията незабавно..

- CSF и стерилни течни проби трябва да се вземат от специализиран лекар.

- Той може да бъде и чиста култура на подозрителен щам, свързан с гореспоменатите патогени.

Изпълнение на техниката с директни проби

- Пробите трябва да се центрофугират, след това супернатантът се изхвърля и се утаява.

- Капка от центрофугирания материал (утайка) и капка китайско мастило или нигрозин се поставят върху чист предмет..

- Тя трябва да се смеси добре и да се покрие с покритие, което позволява на капка да се разпръсне като тънък филм, без да превишава ръбовете.

- След това препаратът се поставя в микроскоп.

- Ако препаратът е твърде тъмен, той може да се разреди с вода.

Изпълнение на техниката с щамове от култура

- Много малка част от млада реколта се взема с игла за засяване и се разтваря в капка китайско мастило, поставено преди това върху чиста пързалка.

- Покривката се поставя отгоре.

- Наблюдава се в микроскоп при 10Х и след това при 40Х.

Можете също така да разтворите част от колонията в дестилирана вода и от там да вземете капка и да я смесите с мастилото. По този начин препаратът няма да бъде толкова дебел, че да е възможно да се наблюдават структурите в изолация; Ако има агломерации, то няма да се наблюдава добре.

Друга методология е следната:

- Поставя се капка от културата в суспензия в единия край на слайда.

- Поставя се капка нигрозин на същия край и се разбърква.

- С помощта на друг слайд, удължете пробата така, сякаш правите хематологична намазка.

- Оставете да изсъхне и наблюдавайте под микроскопа.

Наблюдение в микроскоп

Първо трябва да се фокусирате с 10X цел да имате широк изглед на полето. Впоследствие трябва да търсите, ако има ясни пространства; ако има, фокусирайте с 40X, за да видите подробностите.

облага

- Лесно е да се изпълни.

- Това е икономическа техника.

- Този метод не изисква замазката да бъде фиксирана към топлина или химикали; следователно, микроорганизмите се наблюдават без изкривявания.

- Не е необходимо пресният препарат да се изсушава, така че може да се наблюдава веднага, като се получават резултати бързо.

недостатък

Веднъж сглобени, пресните препарати трябва да се наблюдават незабавно; Ако им е позволено да изсъхнат, вече не е възможно да се спазват и нови.

Оцветяване на тъкани с индийско мастило

Друга функция, която китайското мастило може да изпълни, е в патологичните лаборатории. Това се прилага върху тъканни проби, отстранени хирургично, за да се отбележат границите на резекцията на тумора.

Маркираната тъкан се напръсква с оцетна киселина. Това действа като разяждащо средство и предотвратява излизането на мастилото, когато тъканта е подложена на рутинна обработка за подготовка за биопсия.

Процедурата се състои в къпане на тъканта в алкохол и ксилол, след което се всмуква в парафинов восък. Тази маркировка води патолога при наблюдение на тъканта, като посочва къде е границата на хирургичната резекция или друга интересна точка..

препратки

1. "Нигрозин". Уикипедия, Свободната енциклопедия. 11 юли 2017, 22:46 UTC. 6 Януари 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Китайско мастило". Уикипедия, Свободната енциклопедия. 1 октомври 2018 г., 03:08 UTC. 6 Яну 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Силва Л., Силва С, Фернандез Н., Буено С, Тореш Дж, Рико М, Макиас Дж и сътрудници. (2006 г.). Личен състав на автономната област Екстремадура. Специфична програма Том IV. Редакционна МАД. Севиля-Испания, с. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), специалист лабораторен техник, на галисийската здравна служба (SERGAS). Специфичен за предмета обем 2. Редакционна MAD. Севиля-Испания, стр. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Микробиологична диагноза на Bailey & Scott. 12 изд. Аржентина. Panamericana S.A Редакция